神經(jīng)節(jié)苷脂Gdla調(diào)控小鼠骨瘤FBJ細(xì)胞轉(zhuǎn)移性機(jī)制研究.pdf

1、在已建立的小鼠骨肉瘤FBJ細(xì)胞系中,FBJ—S1細(xì)胞具有低腫瘤轉(zhuǎn)移性并富含神經(jīng)節(jié)苷脂GD1a,而FBJ-LL細(xì)胞則是高腫瘤轉(zhuǎn)移性并缺乏GD1a。迄今已證明存在于細(xì)胞膜表面的GD1a調(diào)控著FBJ細(xì)胞的腫瘤轉(zhuǎn)移能力,如細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性、與基質(zhì)的粘著性、移植到小鼠體內(nèi)后轉(zhuǎn)移到肝臟的克隆數(shù)量等。為闡明GD1a在FBJ細(xì)胞中調(diào)控的特定的分子,用半定量PCR篩選了一系列腫瘤相關(guān)分子,發(fā)現(xiàn)GD1a參與正向調(diào)控兩種腫瘤轉(zhuǎn)化抑制基因——Caveolin-1和S

2、timl的表達(dá)。
　　 對FBJ細(xì)胞腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的深入探索發(fā)現(xiàn),腫瘤壞死因子(帆)可增高FBJ細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性,提高細(xì)胞在無血清條件下的生存率并增加轉(zhuǎn)錄水平的TNFα和MMP-9產(chǎn)量。進(jìn)一步研究證明TNFα在一系列FBJ細(xì)胞系中均與GD1a的含量成反比,GD1a在FBJ細(xì)胞中負(fù)調(diào)控TNFα的表達(dá),Caveolin-1位于TNFα的上游并抑制TNFα的合成。而且,GD1a通過Caveolin-1在caveolae上和TNFR2結(jié)合抑制

3、TNFα。使用特異性抑制劑以及siRNA技術(shù),闡明了GD1a調(diào)節(jié)TNFα表達(dá)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑:1)RhoB/Pkn1和Jak/Stat信號(hào)途徑是必需的TNFα合成通路,并且GD1a抑制TNFα通過RhoB/Pkn1和Jak/Stat信號(hào)途徑；2)MAPK-ERK信號(hào)途徑與TNFα的合成無關(guān),但轉(zhuǎn)導(dǎo)了GD1a抑制TNFα的信號(hào)；3)MAPK-p38和JNK也參與TNFα的合成,但并不介導(dǎo)GD1a調(diào)控TNFα的信號(hào)通路。
　　 RT

4、—PCR結(jié)果揭示,在FBJ細(xì)胞中HGF的基因表達(dá)與GD1a的含量相反。GM2/GD2合成酶正義鏈cDNA轉(zhuǎn)染FBJ—LL細(xì)胞升高GD1a的含量后,降低了HGF的表達(dá)；用GD1a合成酶St3ga12和St3ga15的siRNA共同轉(zhuǎn)染細(xì)胞,成功抑制GD1a的合成后上調(diào)了HGF的水平。用siRNA沉默Pkn1導(dǎo)致HGF水平升高。在Caveolin-1 siRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞內(nèi)引入Caveolin-1正義鏈cDNA重新表達(dá)Caveolin-