GPMV M基因的克隆及其主要抗原位點的原核表達.pdf

1、鵝副粘病毒(GPMV)為副粘病毒科，副粘病毒亞科，腮腺炎病毒屬禽副粘病毒Ⅰ型(APMV-1)中的成員，引起鵝副粘病毒病。該病自1997年由揚州大學王永坤教授報道以來，在國內(nèi)很多地區(qū)流行。鵝副粘病毒病是以消化道病變?yōu)橹饕卣鞯木哂懈叨劝l(fā)病率和死亡率的烈性傳染病，給這些地區(qū)的養(yǎng)鵝業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。初步試驗表明，GPMV與傳統(tǒng)的NDV的致病性不同，并且常規(guī)的NDV疫苗不能提供有效的保護。因此從分子生物學水平上對該病進行研究具有重要的意義

2、?！　”狙芯扛鶕?jù)Genbank中發(fā)表的GPMVSF02株及其它NDV全基因序列，借助Oligo4.1軟件，設(shè)計2對引物，采用RT-巢式PCR方法對鵝副粘病毒JS/1/97/Go株的M基因進行了體外擴增，擴增出與預(yù)期大小相符的M基因的特異性條帶。將擴增出的DNA片斷克隆到pMD18-T載體中，轉(zhuǎn)化TG1感受態(tài)細胞，經(jīng)AMP/IPTG/X-gal平板篩選，酶切和PCR鑒定后獲得陽性重組質(zhì)粒。序列測定表明：M基因全長1095bp，含有一個完

3、整的開放閱讀框架，編碼365個氨基酸殘基，與參考序列比較，核苷酸的同源性為84.8％～98.9％?！　⊙芯抠Y料表明GPMVM基因5'端長444bp的特異片斷主要決定其活性，據(jù)此又設(shè)計合成一對引物，克隆M基因5'端1bp-444bp，命名為M基因主要抗原位點片斷(M1)?！　基因主要抗原位點片斷(M1)同載體PGEX-6P-1連接后，轉(zhuǎn)化入E.Coli.BL21(DE3)PlysS，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達出目標蛋白，與預(yù)計相符。對表達