油桃花芽休眠誘導(dǎo)期PpFAR1-PpFHY3的表達(dá)分析及PpABI5上游調(diào)控因子的篩選.pdf

1、光信號(hào)和植物激素 ABA是誘導(dǎo)休眠的重要因子， FAR-RED ELONGATED HYPOCOTYL3(FHY3)和它的同源基因FAR-RED-IMPAIREDRESPONSE1(FAR1)是phyA信號(hào)途徑中重要的正調(diào)控因子，參與遠(yuǎn)紅光、ABA對(duì)擬南芥種子休眠的調(diào)節(jié)，然而FHY3/FAR1在木本植物花芽休眠中的表達(dá)尚不清楚；ABI5是ABA信號(hào)響應(yīng)的關(guān)鍵基因，研究調(diào)控ABI5基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子對(duì)進(jìn)一步闡述ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控具有重要

2、意義。本研究以‘中油四號(hào)’油桃花芽為材料，根據(jù)NCBI中擬南芥FAR1/FHY3登陸的基因，在擬南芥基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中查得FAR1/FHY3的蛋白序列，與已建立的桃全基因組氨基酸序列進(jìn)行Blast序列比對(duì)，初步篩選出同源氨基酸序列的候選基因，將這些基因通過(guò)Pfam進(jìn)行分析，去除無(wú)FAR1/FHY3保守結(jié)構(gòu)域的基因序列；測(cè)定了5個(gè)同源基因在休眠誘導(dǎo)期的表達(dá)，并在休眠誘導(dǎo)期分別用ABA及遠(yuǎn)紅光處理桃樹(shù)，熒光定量檢測(cè)了基因的表達(dá)量變化；以PpAB

3、I5啟動(dòng)子序列為誘餌，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞構(gòu)建誘餌載體，構(gòu)建桃花芽酵母單雜交cDNA文庫(kù)，經(jīng)同源重組篩選PpABI5啟動(dòng)子的上游轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。主要研究結(jié)果如下：
　　1.桃中FAR1/FHY3的同源基因Prupe.3G186100、Prupe.3G186200、Prupe.4G115100、Prupe.3G186000在休眠誘導(dǎo)期均有上調(diào)，且受ABA誘導(dǎo)表達(dá)上調(diào)，受遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)表達(dá)下調(diào)，而Prupe.2G327900在休眠誘導(dǎo)期表達(dá)下調(diào)，受

4、ABA誘導(dǎo)下調(diào)，受遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)上調(diào)。說(shuō)明PpFRSs基因可能通過(guò)不同的模式參與ABA和遠(yuǎn)紅光對(duì)油桃花芽休眠誘導(dǎo)的調(diào)控。
　　2.構(gòu)建的cDNA文庫(kù)庫(kù)容為1×107 CFU，插入片斷長(zhǎng)度平均在1500bp左右。酵母單雜篩選結(jié)果經(jīng)測(cè)序和 Blast同源性分析，獲得PpDAM3和PpDAM52個(gè)與桃休眠相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子。通過(guò)互作驗(yàn)證進(jìn)一步證實(shí)PpDAM3和PpDAM5與PpABI5存在潛在的結(jié)合關(guān)系，說(shuō)明PpDAM3和PpDAM5可能通過(guò)與