海南產桶形芋螺毒管蛋白質組學的初步研究.pdf

1、蛋白質組學作為一門有效而直觀的研究整體蛋白質的方法，以細胞、組織或體液內蛋白質的存在及其活動方式為研究對象，研究其結構、功能、相互作用和修飾。隨著一百多種模式生物全基因序列先后完成，蛋白質組學在生物的代謝調控、遺傳發(fā)育、生理生化、藥理毒理等研究中，在揭示疾病的發(fā)病機理、尋找腫瘤標志物及研究藥物的作用機制等方面取得了突破性的進展。
　　 芋螺是一種分布于熱帶海洋中的生物，能分泌較高藥用價值的芋螺毒素，具有極高的經濟價值。芋螺毒素是

2、迄今為止所發(fā)現的翻譯后加工最為復雜的多肽，化學合成有活性的芋螺毒素非常艱難。許多蛋白質，如蛋白質二硫鍵異構酶（PDD、修飾酶等，發(fā)揮調控功能和修飾作用，影響毒素的合成和活性。
　　 隨著環(huán)境破壞的日益加劇，造成芋螺資源的流失，保護珍貴的芋螺蛋白資源成為緊迫的任務。運用蛋白質組學研究技術可以從整體水平研究芋螺毒管蛋白，進一步研究與芋螺毒素相關的蛋白，構建芋螺的蛋白庫，保存、開發(fā)芋螺資源。
　　 本研究以海南產桶形芋螺為研究

3、對象，采用雙向電泳、質譜、色譜分離以及生物信息學等技術對其毒管蛋白進行了研究，以期為芋螺毒管的蛋白質組學深入研究打下基礎。
　　 對毒管總蛋白進行SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE，電泳結果顯示芋螺毒管蛋白質分子量主要分布在45-66.2kD，18.4-25 kD和小于14.4kD這3個區(qū)。
　　 從樣品提取方法、水化方式、等電聚焦程序設置、膠條平衡時間和SDS-PAGE膠的濃度等方面對雙向電泳的條件進行

4、了優(yōu)化，獲得了重復性較好、清晰的桶形芋螺毒管總蛋白雙向電泳圖譜。
　　 從桶形芋螺毒管總蛋白雙向電泳膠上共選取了16個蛋白點，采用基質輔助激光解析離子化飛行時間質譜（MALDI-TOF-MS）分析技術，根據2-DE圖譜蛋白點分子量（Mr）和等電點（PI），獲得肽指紋圖譜（PMF），鑒定出PDI等9種蛋白，初步建立了桶形芋螺毒管雙向電泳分析及質譜鑒定的技術平臺。
　　 大、中、小桶形芋螺毒管蛋白分別進行了雙向電泳，通過PD