豬NICE-3基因和pClorf77基因的表達(dá)與轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究.pdf

1、豬的經(jīng)濟(jì)性狀受數(shù)量性狀基因座(QTL)控制，其中一些基因可能起主要作用，即主基因效應(yīng)，通過候選基因法克隆研究豬的主效基因被廣泛采用。平均日增重、背膘厚是豬的重要經(jīng)濟(jì)指標(biāo)，在豬的遺傳育種和性能測(cè)定上深受重視。本研究利用比較基因圖譜，找到與豬4號(hào)染色體上平均日增重、背膘厚QTL區(qū)段同源的人1號(hào)染色體區(qū)段，從中選取了2個(gè)基因作為研究對(duì)象，這兩個(gè)基因目前在豬中尚無研究報(bào)道。為了找到這兩個(gè)基因與豬肌肉生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)的證據(jù)，利用人的同源基因序列為探針

2、搜索豬的EST數(shù)據(jù)庫，根據(jù)EST拼接組成的序列設(shè)計(jì)引物，克隆得到了這兩個(gè)基因的cDNA序列，進(jìn)而得到了DNA序列和啟動(dòng)子序列，并從基因的染色體物理定位、組織表達(dá)譜、蛋白的亞細(xì)胞定位以及啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控等方面對(duì)這兩個(gè)基因進(jìn)行了初步研究，獲得了如下結(jié)果：
　　 (1)首次克隆得到了豬NICE-3基因和pClorf77基因的完整CDS序列、基因組DNA序列及啟動(dòng)子序列，并確定了轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域；其中NICE-3基因的基因組全長(zhǎng)約12.6

3、kb，CDS序列長(zhǎng)762 bp，啟動(dòng)子區(qū)長(zhǎng)約2 kb，分為7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，基因組DNA序列及啟動(dòng)子序列是利用篩選豬BAC文庫的方法獲得的；pClorf77基因的基因組全長(zhǎng)約10.4 kb，CDS序列長(zhǎng)750 bp，啟動(dòng)子區(qū)長(zhǎng)約1.7 kb，分為6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子，啟動(dòng)子序列是利用同源比對(duì)法找到人和鼠該基因的同源區(qū)，據(jù)此設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增得到的。
　　 (2)利用輻射雜種克隆板將豬NICE-3基因和pClorf77基因都定位

4、在了豬4號(hào)染色體上，均與微衛(wèi)星標(biāo)記SW512距離最近，而SW512標(biāo)記與背膘厚、眼肌面積、日增重、亞油酸及油酸含量等性狀相關(guān)。
　　 (3)實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明豬NICE-3基因在肌肉組織(背最長(zhǎng)肌、心肌、股二頭肌)中表達(dá)量較高，其次是在肝、腎和背膘中：而pClorf77基因在肌肉組織(背最長(zhǎng)肌、心肌、股二頭肌)中表達(dá)量較高，在其它組織中相對(duì)較低。
　　 (4)亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明豬NICE-3蛋白分布在核外，且

5、并不局限于某種細(xì)胞器，在線粒體、高爾基體以及內(nèi)脂網(wǎng)中均有表達(dá)；而pClorf77蛋白分布在核內(nèi)。
　　 (5)啟動(dòng)子活性分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明豬NICE-3基因啟動(dòng)子區(qū)的-1341/-1649區(qū)段可能存在一個(gè)轉(zhuǎn)錄抑制子，在-1077/-1341區(qū)段至少存在著一個(gè)轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，轉(zhuǎn)錄核心區(qū)域可能在-1077 bp到-1341 bp之間，位于-1213 bp～-1219 bp處的序列是一個(gè)非常重要的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，它的定點(diǎn)突變對(duì)該啟動(dòng)子的活