RNA沉默抑制子的生化和結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、由21-30nt長度的小RNA介導(dǎo)RNA沉默是特異的基因調(diào)節(jié)機(jī)制，同時(shí)也是植物重要的抗病毒免疫機(jī)制。為了克服植物的免疫機(jī)制，病毒編碼了多種RNA沉默抑制子。探明每種病毒沉默抑制子的生化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)是了解其作用機(jī)制的的關(guān)鍵。本課題主要研究水稻條紋葉枯病毒(RSV)NS3、狐尾花葉紋病毒(FoMV)P26和黃金葛潛伏病毒(PoLV)P14沉默抑制子的生化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)。我們重組表達(dá)純化了這些蛋白，并做了結(jié)晶條件篩選，但沒有獲得晶體。同時(shí)我們探索了

2、NS3蛋白的生化性質(zhì)，我們的結(jié)果顯示NS3蛋白是鋅離子結(jié)合蛋白，能夠形成穩(wěn)定的同源二聚體。NS3識(shí)別長度約10bp的雙鏈RNA。當(dāng)雙鏈RNA長度大于等于20bp時(shí)，出現(xiàn)多個(gè)蛋白結(jié)合位點(diǎn)。我們利用定點(diǎn)突變發(fā)現(xiàn)堿性氨基酸R50、K77、K112、R124G、K173、K174、R175、K196可能參與RNA結(jié)合的氨基酸。FoMV的P26蛋白由于自身聚合而無法獲得晶體，PoLV的P14蛋白由于在沉淀劑存在的情況下發(fā)生沉淀而無法獲得蛋白晶體。