免疫學(xué)應(yīng)用課件

1、三、腫瘤逃逸及其機(jī)制,（一）瘤細(xì)胞缺乏激發(fā)免疫應(yīng)答所必需的成分（二）腫瘤細(xì)胞逃逸和免疫刺激（三）腫瘤抗原誘發(fā)免疫耐受 （四）腫瘤細(xì)胞抗凋亡及誘導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞凋亡（五）機(jī)體免疫功能異常（六）腫瘤逃逸機(jī)制的新觀點(diǎn),（六）腫瘤編輯（cancer immunoediting）,* 自然選擇（natural selection） * 免疫顯性（表位）（immunodominance）,在產(chǎn)生腫瘤逃逸表型的過程中自然選擇腫瘤變異

2、體無免疫治療藥物作用，自然選擇遺傳不穩(wěn)定的變異株；b. 免疫治療壓力下的變異株,血清腫瘤相關(guān)標(biāo)志物（抗原、抗體以及其他標(biāo)志物）；免疫組織化學(xué)法輔助診斷腫瘤；腫瘤相關(guān)基因檢測；體內(nèi)免疫成像診斷；評估腫瘤患者免疫功能狀態(tài)。,四、腫瘤的免疫學(xué)檢測與治療 1.腫瘤患者的免疫學(xué)檢測與診斷,2.腫瘤患者的免疫治療,抗體治療主動(dòng)免疫治療細(xì)胞疫苗；分子疫苗；DNA疫苗被動(dòng)（過繼）免疫治療細(xì)胞因子治療免疫相關(guān)基因治療細(xì)胞因子基

3、因MHC分子基因抗體基因（胞內(nèi)抗體）,缺乏新抗原,,腫瘤特異性主動(dòng)免疫治療增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞TAA/TSA的表達(dá)；增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞MHC分子的表達(dá)細(xì)胞疫苗 1)基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗 * 基因修飾(腫瘤抗原，MHC分子，協(xié)同刺激分子，CK/CKR，AM) →瘤細(xì)胞致瘤性↓免疫原性↑2)基因修飾樹突狀細(xì)胞,缺乏MHC I類分子,,腫瘤特異性主動(dòng)免疫治療增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞TAA/TSA的表達(dá)；增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞M

4、HC分子的表達(dá)細(xì)胞疫苗 1)基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗 * 基因修飾(腫瘤抗原，MHC分子，協(xié)同刺激分子，CK/CKR，AM) →瘤細(xì)胞致瘤性↓免疫原性↑基因修飾樹突狀細(xì)胞,腫瘤特異性主動(dòng)免疫治療增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞TAA/TSA的表達(dá)；增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞MHC分子的表達(dá)細(xì)胞疫苗 1)基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗 * 基因修飾(腫瘤抗原，MHC分子，協(xié)同刺激分子，CK/CKR，AM)

5、 →瘤細(xì)胞致瘤性↓免疫原性↑,腫瘤抗原肽或基因修飾的APC疫苗 * 腫瘤抗原(肽)刺激APC * 腫瘤抗原mRNA導(dǎo)入APC * 腫瘤抗原cDNA轉(zhuǎn)染APC * DC-瘤細(xì)胞嵌合體,,腫瘤特異性主動(dòng)免疫治療增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞TAA/TSA的表達(dá)；增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞MHC分子的表達(dá)細(xì)胞疫苗 1)基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗；2）基因修飾的樹突狀細(xì)胞 * 基因修飾(腫瘤抗原，MHC分子，協(xié)同刺激分子，CK/CKR，A

6、M) →瘤細(xì)胞致瘤性↓免疫原性↑,,負(fù)性和正性免疫檢查點(diǎn)受體及配體,免疫學(xué)應(yīng)用,華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系沈關(guān)心shenguanxin@hust.edu.cn guanxin_shen608@hotmail.com2016.11.22,13,免疫防御,免疫自穩(wěn),免疫監(jiān)視,識(shí)別并清除病原物，抗感染,自身免疫耐受，識(shí)別并清除衰老損傷的細(xì)胞，維持機(jī)體免疫系統(tǒng)功能穩(wěn)態(tài),識(shí)別與清除變異細(xì)胞,免疫系統(tǒng)的三大功能,

7、免疫系統(tǒng)——機(jī)體健康的衛(wèi)士,免疫是把雙刃劍,14,免疫系統(tǒng)--機(jī)體的衛(wèi)士（雙刃劍）,通過免疫機(jī)制發(fā)生的疾病,感染,免疫相關(guān)性疾病,,幾乎涉及各系統(tǒng)、組織器官的疾病,自身免疫性疾病,腫瘤,器官移植,,,,免疫缺陷,,過敏,免疫是把雙刃劍自身-非己分辨差錯(cuò)和失衡引發(fā)疾病,* 將非己視為自身 病毒感染或基因突變 → 細(xì)胞癌變 → 免疫系統(tǒng)對“非己”清除不力 → 惡變細(xì)胞逃脫免

8、疫監(jiān)視而成為腫瘤 病原體頻繁突變和對抗原遮蔽 → 免疫系統(tǒng)對非己分辨出錯(cuò) → 病原體不能被有效清除。 * 將自己視為非己 機(jī)體將自身視為非己而進(jìn)行攻擊（body against itself） →自身免疫病,自身-非己分辯的失衡和疾病的發(fā)生,現(xiàn)代免疫學(xué)研究的核心問題 (現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)促進(jìn)免疫學(xué)的發(fā)展)以免疫細(xì)胞、免疫分子為研究對象現(xiàn)代免疫學(xué)對醫(yī)學(xué)生物學(xué)的推

9、動(dòng) (現(xiàn)代免疫學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)及醫(yī)學(xué)實(shí)踐)科學(xué)研究所用試劑與方法,,免疫生理與免疫病理： 生理性免疫與病理性免疫如何監(jiān)測與發(fā)現(xiàn)？免疫學(xué)檢測與免疫診斷如何使免疫應(yīng)答向有利于機(jī)體健康方向發(fā)展？發(fā)現(xiàn)、調(diào)控（協(xié)調(diào)發(fā)展：免疫預(yù)防與免疫治療）,免疫是把雙刃的劍,1．感染、免疫缺陷?。ˋIDS）免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制及干預(yù)原則； 2. 超敏反應(yīng)與自身免疫病的分子機(jī)制及免疫治療； 3．移植排斥反應(yīng)機(jī)制及干預(yù)原則； 4．腫瘤抗

10、原及腫瘤的免疫學(xué)機(jī)制與診斷治療； 5．免疫細(xì)胞、免疫因子參與的炎癥（感染性與非感染性；可控性與非可控性）與干預(yù)策略。,免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)療實(shí)踐中的應(yīng)用闡明疾病過程的免疫學(xué)機(jī)制,HIV進(jìn)入機(jī)體，進(jìn)入細(xì)胞，破壞CD4+細(xì)胞機(jī)制，發(fā)病機(jī)制，疫苗與變異,分子模擬（共同抗原或交叉抗原） * A型溶血性鏈球菌胞壁成分與人體心肌間質(zhì)、心瓣膜、腎基底膜及其它結(jié)締組織具有相似抗原決定簇 ： 風(fēng)濕性心臟病和急性腎小球腎炎,與人體組織起交叉反應(yīng)的

11、A組鏈球菌抗原,* 大腸桿菌O14與結(jié)腸黏膜有相似的抗原決定簇：潰瘍性結(jié)腸炎； *多種微生物的HSP與人HSP或其他組織抗原存在相似決定簇：腎小球腎炎、慢性活動(dòng)性肝炎、 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE和心肌炎等AID,旁路T細(xì)胞激活B細(xì)胞正常情況下（左）：針對心肌細(xì)胞的自身反應(yīng)性B細(xì)胞功能正常，但自身反應(yīng)性T細(xì)胞耐受，形成對心肌細(xì)胞的自身耐受。某些情況下（右）：微生物抗原具有與正常心肌細(xì)胞相同的B細(xì)胞表位和不同的T細(xì)胞表位?激活針對該T細(xì)胞

12、表位的非自身反應(yīng)性Th細(xì)胞，輔助自身反應(yīng)B細(xì)胞應(yīng)答，產(chǎn)生自身抗體,18-3受者T細(xì)胞對同種異型抗原的直接識(shí)別和間接識(shí)別A．（直接識(shí)別）受者同種反應(yīng)性T細(xì)胞TCR直接識(shí)別供者APC所提呈的外來肽/自身肽-同種異型MHC分子復(fù)合物；B.（間接識(shí)別）受者同種反應(yīng)性T細(xì)胞TCR識(shí)別經(jīng)受者APC加工處理的供者M(jìn)HC抗原肽,18-4 受者同種反應(yīng)性T細(xì)胞交叉識(shí)別pMHC 具有相同或相似復(fù)合結(jié)構(gòu)的不同pMHC可被同一受者TCR所識(shí)別。A

13、.正常免疫應(yīng)答過程中，受者TCR特異性識(shí)別外來抗原肽-自身MHC分子所形成的復(fù)合結(jié)構(gòu)；B/C.同種異體移植中，受者同一TCR可識(shí)別供者外來肽/自身肽-供者M(jìn)HC分子構(gòu)成的復(fù)合結(jié)構(gòu),25,Resolution-associated molecular patterns (RAMPs) in the acute inflammatory response. The acute inflammatory response is initiat

14、ed in response to the presence of conserved microbial products [pathogen-associated molecular patterns (PAMPs)] or to the presence of endogenous molecules released from stressed and necrotic cells in the extracellular mi

15、lieu [damage-associated molecular patterns (DAMPs)]. Both PAMPs and DAMPs cause, or are dependent upon, cellular stress. This initiates the over-expression and release of RAMPs which, in extracellular environs, participa

16、te in limiting and resolving the acute inflammatory responses via a variety of direct and indirect mechanisms.,免疫學(xué)檢測技術(shù)與免疫學(xué)診斷疫苗與免疫學(xué)預(yù)防免疫生物制劑與免疫學(xué)治療,免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)療實(shí)踐中的,免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)療實(shí)踐中的應(yīng)用,免疫學(xué)技術(shù)與免疫學(xué)診斷 * 以mAb為基礎(chǔ)的抗原-抗體反應(yīng)成為生物醫(yī)學(xué)科

17、研和臨床診斷中被最廣泛使用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)； * 免疫標(biāo)記技術(shù)（放射免疫、酶免疫、免疫熒光、發(fā)光免疫等）用于各類組織細(xì)胞和體液中微量蛋白成份的定性、定量和定位。產(chǎn)品研制與開發(fā),一、概述二、免疫細(xì)胞分析技術(shù)三、免疫分子檢測四、免疫相關(guān)基因分析五、免疫標(biāo)記技術(shù)六、新型抗體的制備技術(shù),主要內(nèi)容,免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)療實(shí)踐中的應(yīng)用免疫學(xué)檢測技術(shù)與免疫學(xué)診斷,概念：免疫學(xué)檢測是應(yīng)用免疫學(xué)理論設(shè)計(jì)的一系列測定抗原、抗體、免疫細(xì)胞及其分泌

18、的細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)手段及分子生物學(xué)技術(shù)在免疫學(xué)研究中的應(yīng)用； 免疫學(xué)技術(shù)的應(yīng)用極為廣泛, 疾病的診斷、療效評價(jià)及理論研究等。 優(yōu)點(diǎn): 特異、敏感、簡便、快速。,免疫學(xué)檢測技術(shù)與免疫學(xué)診斷免疫學(xué)診斷,影像學(xué)診斷為肝炎病毒性肝炎還是其他肝炎？哪一類型病毒性肝炎？抗原/抗體為基礎(chǔ)的免疫學(xué)診斷：特異、敏感、簡便、快速。HBV、HAV、BCV等相關(guān)標(biāo)志物,免疫標(biāo)記技術(shù),免疫熒光技術(shù) 放射免疫分析法 酶免疫技術(shù) 發(fā)光免疫測定

19、 金標(biāo)記技術(shù) 生物素親合素標(biāo)記技術(shù),免疫標(biāo)記技術(shù),免疫標(biāo)記技術(shù)是指用熒光素、放射性核素、酶、發(fā)光劑或電子致密物質(zhì)（膠體金、鐵蛋白）作為示蹤劑標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原-抗體反應(yīng)。該方法的優(yōu)點(diǎn)是：高靈敏度、特異性、快速，能定性、定量甚至定位測定，易于觀察結(jié)果并適合自動(dòng)化檢測，廣泛被用于各種微量生物活性物質(zhì)的分析鑒定與定量檢測。根據(jù)實(shí)驗(yàn)中使用標(biāo)記物與檢測方法不同，標(biāo)記技術(shù)可分為免疫熒光技術(shù)，放射免疫技術(shù)，免疫酶標(biāo)技術(shù)，發(fā)光免疫分析及免疫

20、電鏡技術(shù)等。,免疫學(xué)檢測技術(shù)與免疫學(xué)診斷體液免疫檢查（診斷）,體液免疫測定又稱抗原抗體測定，因抗體存在血清中，又稱血清學(xué)方法。主要是建立在抗原抗體結(jié)合具有高度特異性，才能用于臨床診斷。包括：（1）用已知抗原去檢測或鑒定未知的抗體 （血清學(xué)診斷）（2）用已知抗體檢測或鑒定未知的抗原 如對微生物鑒定各種分子，包括半抗原物質(zhì)（如某些藥物、激素及炎癥介質(zhì)等）的測定。,免疫學(xué)檢測與免疫學(xué)診斷以mAb為基礎(chǔ)的抗原-抗體反應(yīng)

21、,免疫學(xué)檢測與免疫學(xué)診斷以mAb為基礎(chǔ)的抗原-抗體反應(yīng),免疫學(xué)檢測技術(shù)與免疫學(xué)診斷細(xì)胞免疫檢查,在體內(nèi)、體外 測定T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫的方法。體內(nèi)法：皮膚試驗(yàn)，如OT皮試。體外法：（1）T細(xì)胞總數(shù)的測定：FCM免疫熒光檢查（2）T細(xì)胞亞群的測定： FCM免疫熒光檢查（3）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：細(xì)胞增殖試驗(yàn)（4） NK活性測定：同位素釋放法。（5）細(xì)胞因子測定： 生物活性測定； 抗原抗體方法測定；分子生物學(xué)測定,流式細(xì)胞儀的

22、臨床應(yīng)用,HIV感染，CD4/CD8絕對計(jì)數(shù)與比值白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細(xì)胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細(xì)胞計(jì)數(shù)殘量白血病細(xì)胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關(guān)疾病,流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用,免疫功能研究造血干細(xì)胞癌癥病人的多藥耐藥性細(xì)胞動(dòng)力學(xué)功能研究血小板分析（心血管疾?。┉h(huán)境微生物分析流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究,免疫細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能與亞細(xì)胞群免疫細(xì)胞表型分析與流式

23、細(xì)胞術(shù)免疫細(xì)胞行為與免疫應(yīng)答效能 免疫細(xì)胞抗原識(shí)別、活化檢測與流式細(xì)胞術(shù) 四聚體技術(shù)； 活化早期事件如細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高、蛋 白磷酸化等； 活化表面分子如CD69、CD25、CD71、 CD154和MHC分子等； 細(xì)胞因子如IFN-?、TNF-?等的表達(dá)免疫細(xì)胞增殖、克隆擴(kuò)增、分化及記憶的檢測與流式細(xì)胞術(shù) 免疫細(xì)胞效應(yīng)、凋亡的檢測與流式細(xì)胞術(shù),流式細(xì)胞儀的免疫學(xué)研究,,外周全

24、血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖（紅細(xì)胞溶解后）,Granulocytic,Lymphoid,Erythroid,CD34 +ve,DRAQ5 DNA content,DRAQ5 DNA content,DRAQ5 DNA content,DRAQ5 DNA content,Monocytic,DRAQ5 DNA content,Identification of myeloid lineage cells by flow cytometry,

25、Diagnosis,Membrane marker,造血系統(tǒng)腫瘤的免疫分型癌基因、耐藥基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測腫瘤相關(guān)抗原分析與癌生物行為相關(guān)的細(xì)胞因子的檢測,MHC-抗原肽四聚體是借助親和素-生物素結(jié)合的原理，在體外將MHC分子（MHC-I類分子包括β2微球蛋白）及其所提呈的抗原肽組裝成的MHC/抗原肽四聚復(fù)合物，作為TCR結(jié)合的配體，用于檢測和分離特異性T細(xì)胞。,MHC-抗原肽四聚體技術(shù)（MHC-peptide tetramer）

26、,HLA-抗原肽四聚體結(jié)構(gòu)示意圖,通過生物素-親和素的作用，將4個(gè) MHC-I/抗原肽單體連接成四聚體，親和素分子上還結(jié)合有熒光標(biāo)記物質(zhì)（PE），用于檢測或分離,21-1,細(xì)胞因子的檢測,免疫學(xué)檢測法：抗原與抗體 生物學(xué)測定法：生物學(xué)活性 分子生物學(xué)測定法：基因表達(dá)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測：蛋白表達(dá)單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子測定法：分泌細(xì)胞因子受體檢測的基本技術(shù)：作用方式與特點(diǎn),細(xì)胞因子檢測,1. 生物學(xué)檢測法優(yōu)點(diǎn)：敏感性較高；缺點(diǎn)

27、：不易找到細(xì)胞依賴株；費(fèi)時(shí)；干擾因素多；方法：增殖法、集落形成法、胞毒活性測定等。2. 免疫學(xué)檢測法優(yōu)點(diǎn)：簡便快速；特異性和重復(fù)性好缺點(diǎn)：敏感性較低、試劑盒較貴。 方法：ELISA、免疫印跡、RIA等。3. 分子生物學(xué)方法優(yōu)點(diǎn)：特異性和敏感性高；預(yù)知細(xì)胞因子的表達(dá)水平 方法：如PCR、Northern Blot 檢測mRNA、 Southern Blot檢測DNA、原位雜交技

28、術(shù)等。4. 芯片技術(shù),免疫學(xué)檢測的基本原理是將細(xì)胞因子作為抗原進(jìn)行定量檢測。如免疫斑點(diǎn)法、ELISA法、RIA法和免疫印跡法等均已用于細(xì)胞因子的檢測。某些細(xì)胞因子含量甚微的樣品(如腦脊液)可用免疫聚合酶鏈反應(yīng)(immuno-PCR)進(jìn)行檢測。,免疫學(xué)檢測法,分子生物學(xué)測定法 RNA印跡法、核酸酶保護(hù)分析、原位雜交、PCR和Real Time PCR等。亦可通過檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的基因組成或mRNA量，推算出細(xì)

29、胞因子的合成量。,單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子測定法,常用的方法有反向溶血空斑試驗(yàn)(RHPA)和反向ELISA斑點(diǎn)試驗(yàn)反向溶血空斑試驗(yàn)(RHPA): RHPA是一種體外檢測抗體分泌細(xì)胞的試驗(yàn), 亦可用于檢測細(xì)胞因子。 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(ELISPOT):所用的包被抗體與酶標(biāo)抗體應(yīng)分別針對細(xì)胞因子 的不同抗原決定簇,ELISPOT實(shí)驗(yàn),B細(xì)胞表面標(biāo)志1、BCR復(fù)合物2、BCR的共受體3、協(xié)同刺激分子4、其他表面分子,B細(xì)胞,B1細(xì)胞

30、B2細(xì)胞調(diào)節(jié)性B細(xì)胞：近年來研究發(fā)現(xiàn)，B細(xì)胞也存在調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（regulatory B cell，Breg）亞群，可通過產(chǎn)生IL-10或TGF-β等抑制過度炎癥反應(yīng)，并可介導(dǎo)免疫耐受。Breg細(xì)胞在某些慢性炎性疾?。ㄈ缒c炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥）、感染和腫瘤等發(fā)生、發(fā)展中起重要調(diào)節(jié)作用。,B細(xì)胞的表面標(biāo)志,B細(xì)胞表面受體 BCR-Igα/Igβ復(fù)合物 CKR：IL-1R、IL-2R、IL-4R、IL-5R等

31、 CR：CR1和CR2 FcR:FcgRII、FcaR、FcmR、FceR 絲裂原受體：LPS、PWMB細(xì)胞表面抗原 MHCI/II CD分子：共受體：CD19、CD20 、 CD21、CD81 協(xié)同刺激分子：CD40、B7-1/2B細(xì)胞功能判定,免疫相關(guān)基因分析,一、細(xì)胞因子基因組DNA或mRNA的檢測二、BCR及TCR克隆性基因重排分析三、補(bǔ)體基因分析四、抗體基因分析五、細(xì)

32、胞膜分子基因分析六、HLA基因分型技術(shù),免疫相關(guān)基因分析,* 包括各種類型的雜交技術(shù)，如轉(zhuǎn)印雜交、斑點(diǎn)雜交、原位雜交等以及PCR技術(shù)等。 * 雜交技術(shù)主要工具是核酸探針，是指一段用放射性核素或其他標(biāo)記物(生物素、熒光素、地高辛等)標(biāo)記，并與目的基因互補(bǔ)的DNA片段或單鏈DNA、RNA。分為cDNA探針、寡核苷酸探針、基因組DNA探針及RNA探針等。,將蛋白質(zhì)組的部分或全部蛋白質(zhì)種類制作成蛋白質(zhì)芯片這樣的芯片可以用于 蛋白質(zhì)

33、-蛋白質(zhì)間的相互作用 蛋白質(zhì)與DNA,小分子相互作用研究 蛋白質(zhì)的表達(dá) 小分子-蛋白質(zhì)結(jié)合診斷疾病 如傳染病、腫瘤、遺傳病及心血管疾病等,蛋白質(zhì)芯片,抗 體 芯 片 將多種（數(shù)百種）不同的特異性抗體制作成抗體芯片,液體芯片系統(tǒng)的應(yīng)用,免疫分析 (e.g., ELISA),酶分析,受體-配基分析,蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用分析,蛋白質(zhì) - 核酸相互作用分析,組織芯片－靈活的研究工具,免疫學(xué)檢測技術(shù)與

34、免疫學(xué)診斷藥物的免疫測定法,原理：是利用Ag-Ab特異結(jié)合，即抗體與其抗原表面的抗原表位(epitope) 結(jié)合。意義：不僅可以定性、定量檢測藥物，而且可借此方法了解藥品的生物學(xué)活性。優(yōu)點(diǎn)：精確、靈敏、簡便、快速。目前，已有許多商品化的抗體（包括單克隆抗體）供藥物的免疫測定法使用。（法醫(yī)學(xué)：毒品檢測）,免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)療實(shí)踐中的應(yīng)用2．疫苗用于預(yù)防傳染病,（1）進(jìn)展 *牛痘疫苗預(yù)防天花病毒感染，1979年5月8日WHO

35、宣布全球消滅天花；即將消滅脊髓灰質(zhì)炎； *控制鼠疫、霍亂、肝炎；其他近百種傳染病也通過疫苗得以預(yù)防，拯救了數(shù)億人生命。 * 近年應(yīng)用疫苗有效地控制了埃博拉病毒流行,最后一例天花患者阿里·毛·馬林,小兒麻痹癥疫情威脅歐洲：《柳葉刀》（The Lancet）雜志在線刊登報(bào)告稱，目前在敘利亞出現(xiàn)的小兒麻痹癥疫情可能給歐洲國家?guī)斫】低{，疫苗接種率較低的國家應(yīng)盡快采取措施，防止疫情擴(kuò)散。,（2）待解決的重點(diǎn) *

36、 針對變異度大（HIV、流感病毒），或亞型多、且病毒蛋白有抗原拮抗作用的病毒（肝炎病毒），研制出具有保護(hù)作用的疫苗，有賴于免疫學(xué)理論與技術(shù)的發(fā)展。理論上* 闡明病毒的分子結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)功能* 分析病毒復(fù)制機(jī)制* 分析易于突變的位點(diǎn)/預(yù)測可能發(fā)生的新突變* 闡明病毒與免疫細(xì)胞間相互作用* 病毒逃逸機(jī)體免疫效應(yīng)的機(jī)制技術(shù)上 * 應(yīng)用噬菌體肽庫與抗體庫技術(shù)篩選病毒抗原表位 * 在基因水平上對病毒進(jìn)行修飾與重組

37、 * 多途徑阻斷病毒對靶細(xì)胞的侵襲,獲得免疫方式,自然獲得,人工獲得,自然自動(dòng)：傳染病、隱性感染,自然被動(dòng)：胎盤、初乳,人工自動(dòng)：接種抗原,人工被動(dòng)：接種抗體,,,,,人工自動(dòng)免疫：輸入抗原 用人工方法接種抗原, 使機(jī)體主動(dòng)建立免疫力。 如接種疫苗，類毒素等。人工被動(dòng)免疫：輸入抗體 是給機(jī)體直接輸入特異性抗體或細(xì)胞因子等免疫效應(yīng)分子或免疫效應(yīng)細(xì)胞，使機(jī)體立即獲得某種特異性免疫力的方法，用于治療或緊急預(yù)防感染的措施，使機(jī)

38、體被動(dòng)獲得免疫力。 如抗毒素、丙種球蛋白、抗菌血清、抗病毒血清，細(xì)胞因子等。,疫苗用于預(yù)防傳染病概念：主要利用人工獲得免疫力,Active and Passive Immunity,人工自動(dòng)免疫與人工被動(dòng)免疫的區(qū)別要點(diǎn),疫苗（包括菌苗）（1）滅活疫苗或死疫（菌）苗：用物理、化學(xué)方法將病原微生物殺死制成，如傷寒、副傷寒、霍亂、狂犬病疫苗等。（2）減毒活疫（菌）苗：用無毒或減毒的病原微生物制成的生物制品。如卡介苗、脊髓灰質(zhì)炎糖丸、麻疹

39、活疫苗等。類毒素疫苗：將外毒素用甲醛處理、使失去毒性，仍保持抗原性的制品。如破傷風(fēng)抗毒素、白喉抗毒素，還有白、百、破三聯(lián)疫苗。,疫苗用于預(yù)防傳染病人工主動(dòng)免疫制劑,新研制的疫苗（1）亞單位疫苗（subunit vaccine）：去除病原體中與激發(fā)保護(hù)性免疫無關(guān)的甚至有害的成分，保留有效免疫原成分所制備的疫苗。（2）結(jié)合疫苗（conjugate vaccine）：結(jié)合疫苗能被T、B細(xì)胞聯(lián)合識(shí)別，B細(xì)胞產(chǎn)生IgG類抗體，獲得了良好的

40、免疫效果（舉例:肺炎或腦膜炎球菌莢膜多糖菌苗）。,疫苗用于預(yù)防傳染病人工主動(dòng)免疫制劑,（3）合成肽疫苗（synthetic peptide vaccine）：根據(jù)有效免疫原性肽段的氨基酸序列，設(shè)計(jì)和合成的免疫原性多肽，以期用最小的肽段激發(fā)有效的特異性免疫應(yīng)答。（4）基因工程疫苗重組抗原疫苗 （recombinant antigen vaccine）：重組載體疫苗 （recombinant vector vaccine）：將編碼病

41、原體有效免疫原的基因插入載體（減毒的病毒或細(xì)菌疫苗株）基因組中，接種后，隨疫苗株在體內(nèi)的增殖而表達(dá)相應(yīng)的抗原。目前使用最廣的載體是痘狀病毒，用其表達(dá)的外源基因很多，已用于乙型肝炎、麻疹、單純皰疹等疫苗的研制。DNA疫苗：又稱核酸疫苗；轉(zhuǎn)基因植物疫苗,（1）抗毒素 如破傷風(fēng)抗毒素、白喉抗毒素，是用相應(yīng)類毒素免疫馬匹制成的，故使用抗毒素時(shí)要注意過敏反應(yīng)。（2）正常人丙種球蛋白和胎盤丙種球蛋白（3）人特異性免疫球蛋白胎盤球蛋

42、白和血漿丙種球蛋白：抗菌血清及抗病毒血清，如抗狂犬病毒血清、抗乙肝病毒血清。,疫苗用于預(yù)防傳染病人工被動(dòng)免疫制劑,計(jì)劃免疫（planned immunization）：根據(jù)某些傳染病的疫情監(jiān)測和人群免疫狀況分析，按照規(guī)定的免疫程序，有計(jì)劃、有組織地用疫苗對人群進(jìn)行預(yù)防接種， 提高人群免疫水平，達(dá)到控制以至最終消滅相應(yīng)傳染病的目的。 免疫程序包括兒童、成人、特殊職業(yè)及特殊地區(qū)人群的免疫程序。我國政府非常關(guān)心兒童的保健工作，制

43、定了一系列的政策、法規(guī)，控制兒童傳染病發(fā)生，以確保兒童的健康成長。,疫苗用于預(yù)防傳染病計(jì)劃免疫：概念,目前我國兒童預(yù)防接種常用疫苗可分為第一類：為國家衛(wèi)生委統(tǒng)一規(guī)定的兒童計(jì)劃免疫用疫苗(免費(fèi)) 1978年開始建立與實(shí)施計(jì)劃免疫用疫苗有卡介苗、脊髓灰質(zhì)炎活疫苗、百白破疫苗、麻疹活疫苗“四苗六病”； 2002年增加乙肝疫苗“五苗七病”； 2008年國家擴(kuò)大了計(jì)劃免疫免費(fèi)提供的疫苗種類增加到15種傳染病

44、“十三苗十五病，新增了甲型肝炎疫苗、乙腦疫苗、流腦多糖疫苗、風(fēng)疹疫苗、腮腺炎疫苗、鉤體病疫苗、流行性出血熱疫苗和炭疽疫苗。 第二類疫苗（兒童和成年人），即自費(fèi)自愿接種的疫苗，如預(yù)防流感和B型流感嗜血桿菌所致疾病，侵襲性肺炎鏈球菌病和輪狀病毒胃腸炎，水痘，狂犬等。不斷有新的疫苗問世。目前接種疫苗可預(yù)防20多種傳染性疾病。,疫苗用于預(yù)防傳染病計(jì)劃免疫：類型,我國兒童計(jì)劃免疫程序：“五苗七病”,79,●牛痘疫苗預(yù)防天花病毒感染

45、；1979年5月8日WHO宣布全球消滅天花?！衿渌俜N傳染病也通過疫苗得以預(yù)防，拯救了數(shù)億人生命。,預(yù)防性疫苗拯救生命,●有待戰(zhàn)勝的疾病，如AIDS，以及新的感染性疾病,如埃博拉等的控制（疫苗）有賴于免疫學(xué)理論與技術(shù)的發(fā)展,概念：根據(jù)免疫學(xué)原理，人為地調(diào)整機(jī)體的免疫功能，維持其相對穩(wěn)定，達(dá)到治療疾病目的的方法。* 抗體為基礎(chǔ)的免疫治療* 細(xì)胞因子/粘附分子及其拮抗劑* 免疫抑制或免疫耐受 →治療自身免疫病（超敏）及移植排斥

46、反應(yīng)* 腫瘤疫苗、免疫細(xì)胞、免疫相關(guān)基因治療* 阻抑免疫性炎癥因子及其受體的抗炎療法* 抗獨(dú)特型抗體或造血干細(xì)胞 →自身免疫病的特異性治療,免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)療實(shí)踐中的應(yīng)用3.疾病的免疫治療（immunotherapy）,根據(jù)對機(jī)體免疫應(yīng)答的影響，分為免疫增強(qiáng)療法和免疫抑制療法；根據(jù)治療的特異性，分為特異性免疫治療和非特異性免疫治療；根據(jù)免疫力產(chǎn)生機(jī)制，分為主動(dòng)免疫治療和被動(dòng)免疫治療等。,疾病的免疫治療（immunot

47、herapy）分類：不同分類原則,,名 稱 治療范圍或特點(diǎn),,,免疫增強(qiáng)療法 感染、腫瘤、自身免疫病的治療 免疫抑制療法 移植排斥、自身免疫病、超敏反應(yīng)病、炎癥 的治療 主動(dòng)免疫治療 人為提供具免

48、疫原性的制劑，使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn) 生特異性免疫 被動(dòng)免疫治療 人為提供免疫效應(yīng)物質(zhì)，直接發(fā)揮免疫效應(yīng) 特異性免疫治療 調(diào)整機(jī)體免疫功能，所用制劑的作用具有抗 原特異性 非特異性免疫治療 調(diào)

49、整機(jī)體免疫功能，所用制劑的作用無抗原 特異性,疾病的免疫生物治療的分類,*免疫增強(qiáng)劑（1）微生物制劑 卡介苗；短小棒狀桿菌（2）免疫細(xì)胞及免疫分子制劑 細(xì)胞因子：① 轉(zhuǎn)移因子； ② IFN； ③ TNF； ④胸腺素； ⑤IL（如IL－2） 免疫細(xì)胞（3）化學(xué)制劑 左旋咪唑；聚

50、肌胞(polyI:C),疾病的免疫生物治療的分類,*免疫抑制劑（1）化學(xué)制劑 烷化劑:如環(huán)磷酰胺 抗代謝藥：如硫唑嘌呤（2）激素：糖皮質(zhì)激素（3）真菌代謝藥物 環(huán)孢霉素A(CsA)；FK-506（4）其他制劑 抗淋巴細(xì)胞球蛋白；抗人T細(xì)胞及其亞群抗體,免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)療實(shí)踐中的應(yīng)用疾病的免疫生物治療的分類,免疫療法制劑,,制劑 增強(qiáng)免疫療法 抑制免疫療法,免疫組織

51、產(chǎn)物微生物制劑 化學(xué)制劑其他,免疫球蛋白,胸腺素,轉(zhuǎn)移因子, 免疫核糖核酸,其它細(xì)胞因子卡介苗,短小棒狀桿菌,細(xì)菌,脂多糖左旋咪唑,多聚核苷酸中草藥,骨髓,胸腺,胚肝細(xì)胞移植,抗淋巴細(xì)胞血清,抗全T細(xì)胞血清,抗T細(xì)胞亞群單克隆抗體環(huán)孢菌素A,抗生素類,FK-506環(huán)磷酰胺,硫唑嘌呤,腎上腺素皮質(zhì)激素類藥物X線照射,胸導(dǎo)管引流,,,分子疫苗：包括合成肽疫苗、重組載體疫苗和DNA疫苗，均可作為

52、腫瘤和感染性疾病的治療性疫苗。例如人工合成的腫瘤相關(guān)抗原多肽能激活特異性T細(xì)胞，誘導(dǎo)特異性CTL的抗腫瘤效應(yīng)。 抗體：EGFR；CD20 細(xì)胞因子：拮抗或補(bǔ)充,疾病的免疫生物治療分子治療,分子疫苗：包括合成肽疫苗、重組載體疫苗和DNA疫苗，均可作為腫瘤和感染性疾病的治療性疫苗。例如人工合成的腫瘤相關(guān)抗原多肽能激活特異性T細(xì)胞，誘導(dǎo)特異性CTL的抗腫瘤效應(yīng)。,疾病的免疫生物治療,免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)療實(shí)踐中的應(yīng)用疾病的免疫

53、生物治療制劑（抗體）,抗體為基礎(chǔ)的免疫治療：中和毒素、激活補(bǔ)體、免疫調(diào)理、ADCC等多種生物學(xué)效應(yīng)，是用于被動(dòng)免疫治療的主要生物制劑；多克隆抗體（抗血清）；單克隆抗體；基因工程抗體；抗細(xì)胞表面分子的抗體（EGFR；CD20） ；抗體靶向治療；抗細(xì)胞因子的抗體。,乳腺癌HER-2檢測,HER-2基因的過表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，是重要的臨床治療監(jiān)測及預(yù)后指標(biāo)，是腫瘤靶向治療藥物選擇的重要靶點(diǎn)。 Herceptin赫賽

54、汀(由瑞士Roche藥廠)，是作用于人類EGFR-2的人源化抗體，主要用于治療HER-2陽性乳腺癌。 HER-2陽性其他腫瘤 HER-2的檢測方法： 赫賽汀治療的效應(yīng)機(jī)制：特異性與腫瘤細(xì)胞表面HER2受體結(jié)合，引起細(xì)胞內(nèi)發(fā)生多種生物效應(yīng)，包括：誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡、減少細(xì)胞表面的HER2的表達(dá)、降低腫瘤細(xì)胞的增殖能力、減少其他導(dǎo)致腫瘤生長因子的產(chǎn)生，增強(qiáng)化療的作用等。赫賽汀還具有細(xì)胞外的作用，可能誘導(dǎo)免疫

55、細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞。,抗人CD20單克隆抗體治療B細(xì)胞淋巴瘤,B細(xì)胞淋巴瘤的抗原靶向治療：表達(dá)在大多數(shù)成熟B細(xì)胞表面，分化為漿細(xì)胞，CD20表達(dá)消失。95%以上的B細(xì)胞淋巴瘤表達(dá)CD20，且無顯著內(nèi)化及脫落。這些特點(diǎn)使其成為McAb療法的理想靶抗原。 利妥昔單抗(rituximab：抗CD20抗體既可單獨(dú)應(yīng)用，亦可作為放射性同位素或細(xì)胞毒制劑的載體，其療效顯著。 抗CD20抗體治療B細(xì)胞淋巴瘤的可能效應(yīng)機(jī)制

56、包括： （1）補(bǔ)體依賴的細(xì)胞溶解作用(CDC作用)； （2）抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)； （3）補(bǔ)體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(CDCC)； （4）細(xì)胞凋亡(apoptosis)。,原理：應(yīng)用針對腫瘤細(xì)胞表面或胞內(nèi)分子（如腫瘤抗原、CKR、癌基因產(chǎn)物等）的抗體或其他相應(yīng)配體，定向地將抗瘤效應(yīng)分子（藥物、放射性核素、酶、毒素、超抗原或其他腫瘤毒性物質(zhì)）攜帶至腫瘤灶

57、局部發(fā)揮治療作用。方案：抗瘤抗體/殺瘤效應(yīng)分子、抗瘤抗體/超抗原、抗CKR抗體/殺瘤效應(yīng)分子、CK/殺瘤效應(yīng)分子、雙特異性抗體等。,基于抗體的靶向治療,靶向治療,免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)療實(shí)踐中的應(yīng)用疾病的免疫生物治療制劑（細(xì)胞因子）,*細(xì)胞因子為基礎(chǔ)的免疫治療外源性細(xì)胞因子治療： EPO、IFN-β、G-CSF、GM-CSF、IFN-α細(xì)胞因子拮抗療法： TNF-α、IL-6抗體可治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎； 可溶型TNF受體可

58、減輕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的炎癥損傷，也可緩解感染性休克； 可溶型IL-1受體可抑制器官移植排斥反應(yīng)。 此外，抗CD25(IL-2Rα)抗體能夠阻斷IL-2對活化T細(xì)胞的促增殖效應(yīng)，從而發(fā)揮抗移植排斥的作用。,部分已批準(zhǔn)上市的重組細(xì)胞因子藥物及其應(yīng)用,,,,,部分細(xì)胞因子R/R拮抗劑、單克隆抗體及其應(yīng)用,,,*細(xì)胞治療 細(xì)胞疫苗（1）腫瘤細(xì)胞疫苗（2）基因修飾的瘤苗（3）樹突狀細(xì)胞疫苗 免疫效應(yīng)細(xì)胞治療：TIL、CIK、

59、CTL、 DC-NK CAR-T 造血干細(xì)胞移植,疾病的免疫生物治療細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療,Immunotherapeutic strategies for tumors: administration of recombinant cytokines, adoptive transfer of tumor-reactive T cells generated

60、in vitro, gene therapy with cytokines and costimulatory molecules, immunotherapy with dendritic cells, stimulation with immunogenic vaccines or antibodies.（免疫檢測（監(jiān)測）點(diǎn)）,102,E. Behring 1901獲首屆諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)：發(fā)現(xiàn)抗毒素，開創(chuàng)免疫血清療法，由此開辟

61、了醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的新途徑。 2011 年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予了三位在抗原提呈細(xì)胞和固有免疫模式識(shí)別病原微生物研究領(lǐng)域做出杰出貢獻(xiàn)的科學(xué)家B. Beutler、J. Hoffman和R.M.Steinman。不知道自己獲得諾貝爾獎(jiǎng)的科學(xué)家 DC發(fā)現(xiàn)者Steinman教授，同時(shí)創(chuàng)建了基于DC的腫瘤疫苗，使自己晚期胰腺癌生存期由平均生存6個(gè)月延至5年，該產(chǎn)品已獲美國FDA批準(zhǔn)上市。,治療型疫苗開創(chuàng)未來,,20

62、05 澳大利亞科學(xué)家 BJ. Marshall， JR.Warren發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌及其在胃炎和胃潰瘍中所起的作用。2008 德國科學(xué)家H. Hausenn證實(shí)HPV可引起宮頸癌，為宮頸癌疫苗今天的誕生奠定了基礎(chǔ)。2008 法國科學(xué)家F. Barré-Sinoussi，L. Montagnier 發(fā)現(xiàn)HIV，使醫(yī)學(xué)界找到了確診艾滋病病毒感染的辦法，延緩了這種病毒的傳播。,免疫學(xué)為生物醫(yī)學(xué)發(fā)展做出了巨大的貢獻(xiàn)首屆諾貝爾生理學(xué)

63、或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予在微生物學(xué)與免疫學(xué)領(lǐng)域做出巨大成就的科學(xué)家,疾病的免疫生物治療,* 細(xì)胞因子/粘附分子及其拮抗劑* 基因工程Ab為基礎(chǔ)的靶向治療* 免疫抑制或免疫耐受 →治療自身免疫病及移植排斥反應(yīng)* 腫瘤疫苗、過繼免疫細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因治療* 腫瘤微環(huán)境及其靶向治療 * 阻抑免疫性炎癥因子及其受體的抗炎療法* 抗獨(dú)特型抗體或造血干細(xì)胞 →自身免疫病的特異性治療*

64、組織工程構(gòu)建人工器官,T細(xì)胞膜分子的發(fā)現(xiàn)及其治療途徑,,免疫治療概覽,CAR-T：BCR識(shí)別+T細(xì)胞效應(yīng),,,,5,CAR-NK,,細(xì)胞銀行：骨髓/臍血干細(xì)胞,,,Immunotherapy,Antibody-based: Naked antibody, bi-, tri-,specific antibody： 腫瘤細(xì)胞；腫瘤微環(huán)境Antibody-drug conjugate (ADC)Antibody-cytokine

65、 conjugate (ACC)BsAb,Immune cell based:,Immune cell based:LAK細(xì)胞CIK細(xì)胞； NK細(xì)胞；TIL細(xì)胞；CTL DC；DC-CIK； DC-NK；DC-T細(xì)胞CAPRI細(xì)胞（混合）,,,,,Antibody-directed, cytokine boosted, cell therapy:CAR-T, CAR-NK,,抗腫瘤；第二代抗體：CTLA-4 mAb； PD

66、-1/PD-L1 mAb（免疫檢測點(diǎn)）,,Andrew M. Scott, Nature Rev. Cancer, 2012, 12: 278-287,111,●Nature Medicine 2012年報(bào)道，根據(jù)Thomson Reuters Pharma的預(yù)測，2012年銷售前十位的藥物中抗體占7個(gè)。,抗體開創(chuàng)未來（產(chǎn)值不斷增加）,業(yè)已獲準(zhǔn)的腫瘤免疫治療方法及其適應(yīng)癥包括針對腫瘤細(xì)胞靶分子：EGFR、CD19CD20等，關(guān)鍵尋找

67、新的腫瘤相關(guān)抗原針對腫瘤微環(huán)境：負(fù)性調(diào)節(jié)分子等，關(guān)鍵腫瘤微環(huán)境：CTLA-A4、PD1等（不斷增加）,免疫學(xué)研究相關(guān)新技術(shù),基因工程、蛋白質(zhì)工程及細(xì)胞工程技術(shù) →→獲得各種免疫分子或其融合蛋白；新型基因分析、蛋白質(zhì)分析與細(xì)胞分析技術(shù) →→分析免疫基因表達(dá)、抗原表位與免疫分 子間以及免疫細(xì)胞間的相互作用 →→發(fā)現(xiàn)新的免疫分子；闡明免疫識(shí)別機(jī)制特異性T細(xì)胞克隆的建立 →→發(fā)現(xiàn)

68、特異性腫瘤抗原；轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及基因敲除動(dòng)物的建立 →→獲得產(chǎn)生人抗體的小鼠免疫相關(guān)動(dòng)物模型的建立：嵌合小鼠活體免疫光學(xué)成像技術(shù)：活體觀察免疫細(xì)胞的運(yùn)動(dòng),免疫學(xué)理論/技術(shù)在醫(yī)藥學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)用免疫產(chǎn)品的研制：近10000種藥品，其中生物藥占市場20％,*抗體研制：各種抗體，HIV，HBV中和抗體等：2012年前10位銷售額的藥品中抗體占6個(gè)（如CD19,CD20,erb2等）； 利潤相對較高些*細(xì)胞因子研制