人用單克隆抗體質(zhì)量控制技術(shù)

1、人用單克隆抗體質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則人用單克隆抗體質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則本要點適用于供治療的體內(nèi)診斷用的利用雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體，適用于在人體內(nèi)應(yīng)用的利用重復(fù)DNA技術(shù)制備的基因工程抗體一、雜交瘤技術(shù)制備的單克隆抗體（一）雜交瘤細胞1親本細胞（1）骨髓瘤細胞SP20或其他適宜的骨髓瘤細胞系。應(yīng)為不合成或不分泌免疫球蛋白鏈型，具有符合骨髓瘤細胞的染色體特征，并有明確的來源歷史及符合要求的保存條件。（2）免疫親代細胞經(jīng)抗原免疫的鼠脾B淋巴

2、細胞或外周血B淋巴細胞。應(yīng)有明確的免疫原來源、性質(zhì)及動物種系，免疫原詳細的制備過程。適宜的免疫方案及免疫淋巴細胞制備的方法。2細胞融合與克隆化采用適宜的方法進行融合、篩選及克隆化。3雜交瘤細胞檢定（1）抗體分泌穩(wěn)定性連續(xù)克隆化后抗體陽性率達100%，經(jīng)體外連續(xù)傳代3個月以上和反復(fù)凍存、復(fù)蘇，細胞系能保持穩(wěn)定分泌特異性抗體。（2）細胞核學(xué)特征檢查細胞分裂中期染色體，應(yīng)符合雜交瘤細胞特征。4鼠源病毒檢查按附錄要求檢測鼠源病毒。5支原體檢查按

3、現(xiàn)行《中國藥典》生物制品無菌試驗規(guī)程進行。6無菌試驗按現(xiàn)行《中國藥典》生物制品無菌試驗規(guī)程進行。下主細胞庫來自原始細胞庫、工作細胞庫來自主細胞庫。各級細胞庫應(yīng)有詳細的制備過程、檢定情況及管理規(guī)定等。四、單抗生產(chǎn)包括用小鼠腹水法和細胞培養(yǎng)法制備。（一）小鼠腹水法1小鼠制備腹水必需使用合格的SPF級BACBC小鼠或BACBC和瑞士小鼠雜交子一代。2動物實驗設(shè)施動物實驗設(shè)施應(yīng)有相關(guān)部門頒發(fā)的二級以上合格證。3腹水制備取適量擴增培養(yǎng)的雜交瘤細胞

4、注射小鼠腹腔制備腹水，小鼠可以預(yù)先用液體石蠟或降植烷等處理。（二）細胞培養(yǎng)法可以采用發(fā)酵罐培養(yǎng)，亦可用細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)收集上清液制備單克隆抗體。培養(yǎng)基用無牛血清或低牛血清培養(yǎng)基，不能用內(nèi)酰胺類抗生素。（三）抗體純化可采用鹽析法、分子篩層析、離子交換親和層析等適宜的方法。1盡可能選用一些不引起免疫球蛋白聚合、變性等的純化方法及條件。2應(yīng)驗證所用的純化方法能去除可能存在的非目標產(chǎn)物污染，如不需要的免疫球蛋白分子、宿主DNA、用于生產(chǎn)腹水抗體的