debaryomycessp.甘油激酶的分離純化及基本性質(zhì)研究

1、四川大學(xué)碩士學(xué)位論文Debaryomyces sp.甘油激酶的分離純化及基本性質(zhì)研究姓名：辛渝申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：孟延發(fā)20060425四川I 大學(xué)碩士學(xué)位論文甘油在3 一磷酸甘油脫氫酶( G ．3 ．P D H ) 的催化下氧化成磷酸二羥丙酮，反應(yīng)中需要有M 礦+ 和A T P 的參與【7 】。甘油的氧化是先經(jīng)甘油激酶及A T P 的作用轉(zhuǎn)變成a ．磷酸甘油。a ．磷酸甘油再經(jīng)磷酸甘油脫氫酶及輔酶I

2、的作用，轉(zhuǎn)變?yōu)榱姿岫u丙酮．磷酸二羥丙酮可以循酵解途徑生成丙酮酸，再進(jìn)入三羧酸循環(huán)氧化。磷酸二羥丙酮也可逆酵解途徑生成糖。由于脂肪細(xì)胞缺少甘油激酶，所以脂解作用產(chǎn)生的甘油不能被脂肪細(xì)胞利用，必須通過血液運(yùn)至肝臟進(jìn)行代謝。在肝細(xì)胞，甘油首先在甘油激酶的催化下形成a 一磷酸甘油，再進(jìn)一步在磷酸甘油脫氫酶的作用下生成磷酸二羥丙酮。磷酸二羥丙酮可轉(zhuǎn)變?yōu)? 一磷酸甘油醛進(jìn)入酵解或糖異生途徑。因此在肝細(xì)胞中甘油有兩種前途：一種是進(jìn)入酵解途徑轉(zhuǎn)變成丙

3、酮酸然后再進(jìn)入三羧酸循環(huán)徹底氧化供能：另一種是沿酵解的逆反應(yīng)異生為葡萄塘I s - 9 1 。甘油激酶作為甘油代謝調(diào)控中的重要酶類舊，在2 0 世紀(jì)6 0 年代首先由“n 和他的同事從大腸桿菌中分離得到并進(jìn)行了研究。甘油激酶能夠催化A T P ．M g 依賴的甘油磷酸化產(chǎn)生s n ．3 ．甘油磷酸，是甘油代謝中的一個(gè)限速酶1 1 0 l 。甘油激酶是細(xì)胞膜上結(jié)合的糖激酶家族中的一員，或者細(xì)胞外膜上結(jié)合的陰離子電壓依賴通道酶類。目前己有對

4、大腸桿菌甘油激酶的部分研究，該酶受到l ，6 - - - 磷酸果糖的反饋抑制1 ¨J 。這種抑制與目6 訂大多數(shù)研究的剮構(gòu)酶比較，它被反映在對催化速度而不是底物親和性的改變上。也就是說，甘油激酶是一種v型的別構(gòu)酶I 體1 3 1 。目靜國外甘油激酶的研究已取得較大進(jìn)展，主要集中在對高級結(jié)構(gòu)、克隆表達(dá)等方面的研究I t 4 - 1 5 ] ，其主要研究的柬源為微生物，如大腸桿菌( E s c h e d c h i a c o

5、l i ) 、嗜熱脂肪芽孢桿菌( B a c i l l u ss t e a r o t h e r m o p h i l u s ) 、卻氏錐體蟲( T r y p a n o s o m ab r u c c i ) 等，國內(nèi)對甘油傲酶的研究起步較晚，除在1 9 9 2 年由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院對甘油激酶的純化工藝有過報(bào)道外。尚未有其它的研究1 1 7 ．J 8 J 。鑒于目前甘油激酶作為甘油三脂診斷試劑盒中關(guān)鍵酶的地位，對其離純