鈣網(wǎng)蛋白介導的凋亡在早期先兆流產過程中的作用研究.pdf

1、目的：鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin，CRT)是一種在結構和功能上具有高度保守性的Ca2+結合蛋白，近年來研究表明CRT的表達水平與生理妊娠和病理妊娠都密切相關。然而，目前對其作用機制仍不十分明確。本課題旨在通過對早期先兆流產絨毛和蛻膜組織中CRT表達水平的檢測和體外實驗中觀察過表達與下調CRT時人胎盤絨毛膜癌細胞(BeWo)中Caspase-3的表達情況來探索其介導的凋亡與先兆流產的關系。
　　方法：(1)分別收集并處理早期

2、正常妊娠及早期先兆流產患者人工流產后的絨毛和蛻膜組織；(2)免疫組織化學檢測CRT蛋白的表達；Western blot檢測CRT蛋白的表達；QPCR檢測CRT mRNA的表達；(3)合成并檢測質粒mEmerald-CRT的表達；(4)合成并檢測si-CRT的表達；(5)分別轉染質粒mEmerald-CRT與si-CRT至BeWo細胞中，檢測CRT及Caspase-3的表達。
　　結果：(1)收集正常人流組（35例）與先兆流產組的病

3、例標本（40例）；(2)免疫組化可見陽性信號定位于發(fā)育不良的絨毛滋養(yǎng)層細胞和蛻膜細胞的胞漿和胞膜上，先兆流產組染色比正常早孕組深，面積更大；Western blot檢測CRT蛋白的表達量在先兆流產組高于正常人流組；QPCR檢測CRT mRNA的表達量在先兆流產組高于正常人流組；(3)合成并檢測質粒mEmerald-CRT的表達；(4)合成并檢測si-CRT的表達；(5)成功轉染質粒mEmerald-CRT至BeWo細胞中， QPCR檢測

4、CRT mRNA與Caspase-3 mRNA在質粒轉染組高于對照組，P<0.05；Western blot檢測CRT與Caspase-3蛋白表達量在質粒轉染組高于對照組，P<0.05；(6)成功轉染si-CRT至BeWo細胞中，QPCR檢測CRT mRNA與Caspase-3 mRNA在si-CRT組低于對照組，P<0.05；Western blot檢測CRT與Caspase-3蛋白表達量在si-CRT組低于陰性對照組，P<0.05。