一種香魚(yú)C-型凝集素受體基因的分子克隆和功能研究.pdf

1、本文對(duì)香魚(yú)C-型凝集素受體基因的分子克隆和功能進(jìn)行了研究。C-型凝集素受體（C-type lectin receptors,CLRs）是一類能識(shí)別碳水化合物的重要模式識(shí)別分子。但是這些受體在魚(yú)類免疫系統(tǒng)中的作用卻知之甚少。本研究克隆了香魚(yú)的一個(gè)CLR基因，暫時(shí)命名為PaCD209L。PaCD209LcDNA序列全長(zhǎng)1464 nt，編碼一個(gè)約31.5kD由281個(gè)氨基酸（AA）殘基聚合而成的多肽鏈，對(duì)預(yù)測(cè)的PaCD209L氨基酸序列與其他

2、魚(yú)類 CLRs的序列多重比對(duì)表明，PaCD209L蛋白質(zhì)分子內(nèi)含有CLRs的典型特征，但無(wú)Ca2+結(jié)合位點(diǎn)。序列同源比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明，PaCD209L與虹鱒魚(yú)的CD209aE基因有最高的氨基酸相似性，相似率高達(dá)44％。在健康香魚(yú)中，熒光定量（RT-qPCR）檢測(cè)表明，PaCD209L基因mRNA主要在腦和心臟組織表達(dá)。鰻弧菌感染后，在香魚(yú)所有檢測(cè)的組織和單核/巨噬細(xì)胞（Monocytes/macrophages，MO/MΦ）中，

3、PaCD209LmRNA表達(dá)水平都上調(diào)。我們用原核表達(dá)的方法獲得了PaCD209L的重組蛋白并制備了其抗血清，免疫印跡分析表明，天然的PaCD209L是糖基化的，并且MO/MΦ中PaCD209L蛋白在鰻弧菌感染后也顯著性表達(dá)上調(diào)。此外，對(duì)rPaCD209L的糖結(jié)合能力的研究結(jié)果表明，rPaCD209L對(duì)多糖（肽聚糖和脂多糖）的結(jié)合能力明顯強(qiáng)于單糖（D-甘露糖和D-半乳糖）。在缺乏或存在Ca2+時(shí)，rPaCD209L均能選擇性地結(jié)合G+菌