血友病A家系的直接和間接基因診斷.pdf

1、目的:
　　該研究針對溫州地區(qū)甲型血友病(HA)家系，首先進(jìn)行直接基因診斷，然后根據(jù)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列(VNTR)多態(tài)性、短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)多態(tài)性和限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)進(jìn)行間接基因診斷，為基于HA癥狀前、攜帶者基因診斷結(jié)果的遺傳咨詢和生育指導(dǎo)提供依據(jù)。
　　方法:
　　針對5例HA先證者，首先根據(jù)HA先證者的FⅧ促凝活性(coagulation factorⅧactivity，F(xiàn)Ⅷ∶C)測定結(jié)果，對

2、HA先證者進(jìn)行分型。采用倒位位移PCR(IS-PCR)進(jìn)行凝血因子Ⅷ(FⅧ)inv22、de122、dup22、inv1的檢測。然后進(jìn)行單體型基因連鎖分析。采用PCR檢測FⅧ基因外的DXS52(St14)位點(diǎn)的VNTR多態(tài)性，檢測FⅧ基因外的DXS15(CA)n、DXS9901(GT)n、DXS1073(GT)n位點(diǎn)和內(nèi)含子1(GT)n、13(CA)n、22(GT)n(AG)n、24(GT)n位點(diǎn)的STR多態(tài)性并經(jīng)毛細(xì)管電泳確證。另外采

3、用PCR產(chǎn)物限制酶切檢測FⅧ基因的內(nèi)含子18、19、22位點(diǎn)的RFLP多態(tài)性。
　　結(jié)果:
　　根據(jù)國際一期法對HA先證者進(jìn)行FⅧ活性的測定結(jié)果顯示，這些HA先證者的FⅧ活性均小于1％，根據(jù)臨床分型均為重型HA。以其中4個HA家系為例報道研究結(jié)果。家系三的先證者為遠(yuǎn)端Inv22患者，先證者母親為遠(yuǎn)端inv22攜帶者，先證者父親為正常者。先證者、先證者母親、先證者父親均未發(fā)生de122或dup22，并且均未發(fā)生inv1。家系二

4、先證者外婆肯定不是攜帶者，先證者的X染色體來自外公，但已知外公不是患者，那么按照最大風(fēng)險估計(jì)，母親的那條來自外公的X染色體在外公生殖細(xì)胞中FⅧ基因發(fā)生了突變，母親是攜帶者，先證者年幼妹妹是攜帶者，將來有生育患兒的風(fēng)險。大姨及其女兒不是攜帶者。家系四先證者的致病X染色體來自其母親，其母親為攜帶者，年幼弟弟肯定為正常人。先證者外婆為攜帶者，先證者外公正常。先證者小姨肯定為攜帶者（盡管后代未曾有患者），先證者小姨年幼兒子肯定為正常人。家系五先