miR-29c調(diào)控MMP2在胰腺癌轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、目的:
　　研究miR-29c在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用
　　方法:
　　1.RT-PCR檢測(cè)5株不同分化能力胰腺癌細(xì)胞株(PANC-1，BxPc-3，Hs766t，cFPAN，Capan1)的miR-29s的表達(dá)，Western Blot及明膠酶譜法檢測(cè)5株不同分化能力胰腺癌細(xì)胞MMP2的表達(dá)和活性，利用Spearman等級(jí)相關(guān)統(tǒng)計(jì)方法分析在胰腺癌細(xì)胞中miR-29s表達(dá)與MMP2表達(dá)的相關(guān)性。
　　2.通過(guò)轉(zhuǎn)染

2、miRNA mimic和miRNA inhibitor分別構(gòu)建miR-29c的過(guò)表達(dá)和干擾表達(dá);CCK-8檢測(cè)miR-29c表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖能力影響;Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)miR-29c表達(dá)對(duì)胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。
　　3.結(jié)合生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和熒光素酶活性報(bào)告基因證實(shí)miR-29c調(diào)控MMP2表達(dá)的分子機(jī)制。
　　4.通過(guò)裸鼠原位胰腺癌種植模型篩選出自發(fā)性高肝轉(zhuǎn)移胰腺癌細(xì)

3、胞亞群(Hs766t、Hs766t-L1和Hs766t-L2)，分別檢測(cè)miR-29c和MMP2的表達(dá)，分析其表達(dá)與轉(zhuǎn)移能力的相關(guān)性;利用所獲得高肝轉(zhuǎn)移胰腺癌細(xì)胞活體驗(yàn)證miR-29s對(duì)胰腺癌轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　5.RT-PCR檢測(cè)胰腺癌組織及其癌旁組織miR-29c的表達(dá)，免疫組化檢測(cè)胰腺癌組織及其癌旁組織MMP2蛋白表達(dá)，分別分析其表達(dá)與臨床病理參數(shù)相關(guān)性;Kaplan-Meier統(tǒng)計(jì)方法分析miR-29c表達(dá)對(duì)胰腺癌預(yù)后的

4、影響。
　　結(jié)果:
　　1.在胰腺癌細(xì)胞中，miR-29c表達(dá)與MMP2蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
　　2.過(guò)表達(dá)miR-29c對(duì)胰腺癌細(xì)胞的增殖能力無(wú)影響，但可明顯抑制胰腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力;干擾miR-29c表達(dá)后可顯著增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
　　3.生物信息學(xué)預(yù)測(cè)提示:MMP2'UTR存在一個(gè)miR-29c結(jié)合位點(diǎn);過(guò)表達(dá)miR-29c可顯著降低MMP2 mRNA和蛋白表達(dá)水平，干擾miR-29c表達(dá)

5、后可顯著上調(diào)MMP2mRNA和蛋白表達(dá)水平;miR-29c可顯著抑制野生型報(bào)告基因熒光素酶活性，而對(duì)突變型報(bào)告基因熒光素酶活性無(wú)影響。
　　4.通過(guò)裸鼠原位胰腺癌種植模型，體外分離并培養(yǎng)出自發(fā)性高肝轉(zhuǎn)移胰腺癌細(xì)胞亞群(Hs766t、Hs766t-L1和Hs766t-L2)，miR-29c表達(dá)與胰腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能呈負(fù)相關(guān)，而MMP2蛋白表達(dá)與胰腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能呈正相關(guān);利用高轉(zhuǎn)移潛能胰腺癌細(xì)胞Hs766t-L2構(gòu)建裸鼠原位胰腺癌動(dòng)

6、物模型，過(guò)表達(dá)miR-29c明顯抑制裸鼠原位胰腺癌自發(fā)性肝轉(zhuǎn)移。
　　5.在胰腺癌臨床樣本中，miR-29c的表達(dá)明顯低于其對(duì)應(yīng)的癌旁組織，且與MMP2蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān);miR-29c的表達(dá)與胰腺癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM期相關(guān);同時(shí)miR-29c的表達(dá)是影響胰腺癌預(yù)后的獨(dú)立因素。
　　結(jié)論:
　　1.在細(xì)胞水平和活體水平證實(shí)miR-29c通過(guò)靶向調(diào)控MMP2表達(dá)抑制胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移。
　　2.miR-29