介導DNA聚合酶Pol δ小亞基p50泛素化的E3蛋白鑒定.pdf

1、哺乳動物的DNA聚合酶δ(Polδ)被認為是聚合酶B家族的一個成員是第一個被發(fā)現(xiàn)同時具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性的真核DNA聚合酶。早期的研究包括從小牛胸腺或人類胎盤分離得到的Polδ復合物表明Polδ是僅由p125和p50兩個亞基組成的二聚體。之后的研究又發(fā)現(xiàn)了2個新的亞基，即p68/66亞基，一種粟酒裂殖酵母Cdc27或啤酒酵母Polδ及Pol32的一種同源物，p12亞基，類似于粟酒裂殖酵母Polδ的Cdm1.現(xiàn)在

2、哺乳動物Polδ被認為是至少由p125，p50，p68和p12四亞基組成的異源四聚體。
　　 作為三種主要的聚合酶α(Polα)，δ(Polδ)，andε(Polε)之一，在染色體DNA合成中Polδ通過與增殖細胞核抗原(PCNA)相互作用而扮演著至關重要的角色，PCNA是一種環(huán)狀夾環(huán)結構的蛋白，是Polδ的輔助蛋白，能刺激Polδ的活性，并在復制中是不可或缺的因素。
　　 哺乳動物通過主動防御機制來應對DNA損傷，被稱

3、為DNA損傷應答(DDR)。這一機制通過募集或裝備一系列與修復相關的蛋白復合物并激活DNA修復系統(tǒng)，激活細胞周期檢查點甚至細胞凋亡等程序來應對DNA損傷。近期的研究展示了一種新的哺乳動物的應對損傷的機制，當DNA受到紫外照射，或化學試劑處理，復制壓力等因素而產(chǎn)生DNA損傷時，Polδ的小亞基p12會快速降解使Polδ從四聚體形式轉變成三聚體形式。p12的降解依賴于ATR/Chk1激酶信號途徑并通過泛素化途經(jīng)降解。同時近期的研究表明當處于

4、S期的細胞經(jīng)紫外照射處理或遺傳毒性試劑處理后所造成的細胞損傷會激活DNA損傷耐受機制(DDT)途經(jīng)控制的PCNA的泛素化。
　　 本研究發(fā)現(xiàn):經(jīng)UV處理的HeLa細胞裂解液經(jīng)免疫親和層析柱和分子篩之后可以分離得到Polδ結合蛋白。令人感興趣的是，RNF8被鑒定出是Polδ結合蛋白并作為E3連接酶通過與UbcH5c E2酶作用介導小亞基p50的泛素化，同時通過熒光顯微鏡可以觀察到，經(jīng)UV處理的細胞中RNF8可以通過與Polδ的結合