雷帕霉素拮抗灰葡萄孢菌的作用研究及分子機制初探.pdf

1、雷帕霉素是一種具有抗真菌活性的大環(huán)內(nèi)酯類物質(zhì)。通過雷帕霉素對灰葡萄孢菌拮抗實驗，確定了雷帕霉素的抗真菌特性；通過對雷帕霉素作用靶標(biāo)蛋白的相關(guān)基因的克隆，獲得了灰葡萄孢菌BcFKBP基因和BcTOR基因的cDNA序列；利用RNA干擾技術(shù)，獲得了BcTOR基因的沉默菌株并進行了初步功能探究。
　　本研究獲得結(jié)果主要如下：
　　1.測定了雷帕霉素對灰葡萄孢菌WY、油菜菌核病菌、水稻紋枯病菌、棉花枯萎病菌四種植物病原真菌的抑菌活性并

2、得到各自的毒力方程及EC50：對灰葡萄孢菌的毒力方程為y=7.9875+1.0356x，EC50為（0.0013±0.0002）μg/mL；對油菜菌核病菌的毒力方程為y=8.8158+1.0127x，EC50為（0.0002±0.0001）μg/mL；對水稻紋枯病菌的毒力方程為y=8.0036+1.2529x，EC50為（0.0040±0.0004）μg/mL；對棉花枯萎病菌的毒力方程為y=7.8462+1.1748x，EC50為（0.

3、0038±0.0006）μg/mL。
　　2.比較了雷帕霉素和一般化學(xué)農(nóng)藥對灰葡萄孢菌WY的抑制效果，結(jié)果表明：雷帕霉素對灰葡萄孢菌WY菌絲生長的抑制效果顯著高于嘧菌酯和丙烷脒，其EC50分別為嘧菌酯的1/2490、丙烷脒的1/2930。
　　3.研究了不同氮源條件下，雷帕霉素對灰葡萄孢菌WY的抑菌效果，結(jié)果表明：雷帕霉素對以硝態(tài)氮、銨態(tài)氮、尿素為唯一氮源的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上的灰葡萄孢菌WY生長抑制差異不顯著，但與谷氨酸、PDA為

4、氮源的培養(yǎng)基上相比生長抑制差異顯著。
　　4.顯微觀察發(fā)現(xiàn)，灰葡萄孢菌WY經(jīng)雷帕霉素處理后，菌絲表現(xiàn)出生長受到抑制和提前衰老的癥狀；有趣的是，雷帕霉素不影響孢子萌發(fā)。
　　5.對雷帕霉素作用靶標(biāo)蛋白的相關(guān)基因的克隆，獲得了灰葡萄孢菌WY的FKBP基因的兩個cDNA序列（BcFKBP-1，615bp；BcFKBP-2，1413bp）和TOR基因的一個cDNA序列（BcTOR，7296bp）。
　　6.獲得了雷帕霉素靶標(biāo)T

5、OR基因的干擾載體，并經(jīng)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)得到三株有潮霉素抗性的沉默菌株Bc_TH94a、Bc-TH94c、Bc-TH94d，對TOR基因的沉默率分別為51.1％、34.3%、40.7%。進一步研究表明，相對于野生型菌株Bc-WY，沉默菌株在平板上的菌絲生長速率降低，生長速率抑制率分別為39.34%、51.18%、74.27%，且在不同氮源基礎(chǔ)培養(yǎng)基上菌絲生長速率也有差異；相對于野生型菌株Bc-WY，沉默菌株對草莓葉片、草莓果實和番茄果實的