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文檔簡介
1、系水力(water holding capacity, WHC)是指豬肉在施加外力的條件下保持水分的能力,是衡量豬肉質(zhì)性狀的重要標準之一。提高系水力可以避免豬肉中水分的大量流失,減少生產(chǎn)者在經(jīng)濟利益上的損失,同時可以改善豬肉的品質(zhì)和風(fēng)味。糖酵解途徑是影響系水力高低的關(guān)鍵因素之一,磷酸甘油酸變位酶(phosphoglycerate mutase,PGAM2)、磷酸化酶激酶(phosphorylase kinase gamma1,PHKG1
2、)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase A,LDHA)基因編碼糖酵解途徑中的關(guān)鍵酶,并且研究表明這三個基因與多個肉質(zhì)性狀密切相關(guān),它們可能通過糖酵解途徑影響到系水力。因此,本實驗以PGAM2、PHKG1和LDHA基因作為候選基因,篩選啟動子區(qū)的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位點,研究基因啟動子區(qū)SNP位點對基因表達水平的影響,及其與系水力的相關(guān)性,旨在尋找與系水
3、力相關(guān)的分子遺傳標記。
本實驗首先選取了系水力高組和低組各14個樣品,通過對三個候選基因表達水平的分析,發(fā)現(xiàn)PGAM2和PHKG1基因的表達與系水力水平呈負相關(guān)(p<0.05)。將高組和低組的DNA樣品進行混池,通過比較測序,在PGAM2啟動子區(qū)發(fā)現(xiàn)一個突變位點c.-360 T>C,其等位基因在高組和低組之間的分布呈顯著差異。
通過等位基因特異性PCR技術(shù)(AS-PCR)對PGAM2基因c.-360 T>C位點在17
4、0頭三元雜交豬中進行了基因分型,獲得CC,TT和CT三種基因型。統(tǒng)計分析表明,CC型個體的系水力顯著低于TT型個體(p<0.05)。基因表達分析表明,CC型個體PGAM2基因表達水平顯著高于TT型個體(p<0.05)。通過雙熒光素酶活性分析同樣顯示,CC型的啟動子活性顯著高于TT型(p<0.05)。通過轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測,發(fā)現(xiàn)SNP位點c.-360C可以結(jié)合CREB,TAXCREB和v-Maf三種轉(zhuǎn)錄因子,c.-360T可以結(jié)合LTSM一種轉(zhuǎn)
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