指導(dǎo)粟酒裂殖酵母U2snRNA中Um3及Um11修飾的snoRNA的研究.pdf

1、該研究對(duì)粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)中一個(gè)新的snoRNA--mgU2-3/11 snoRNA(methylation guidefor U2snRNA U3and U11)進(jìn)行了鑒定,并對(duì)其指導(dǎo)U2 snRNA2'-O-核糖甲基化修飾的功能進(jìn)行了證明.為U2 snRNA的2'-O-核糖甲基化修飾可由snoRNA指導(dǎo)的觀點(diǎn)提供了酵母遺傳學(xué)上的證據(jù).為粟酒裂殖酵母中U2 snRNA的核糖甲基化修飾機(jī)制及

2、其生物學(xué)意義的進(jìn)一步闡明提供了重要基礎(chǔ).主要結(jié)果如下:1.通過(guò)計(jì)算機(jī)搜索并結(jié)合Northern雜交和逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)分析,在粟酒裂殖酵母中發(fā)現(xiàn)并鑒定了一個(gè)新的snoRNA--mgU2-3/11 snoRNA.它在細(xì)胞中穩(wěn)定存在,大小為161nt,包含box C/D、box C'/D'結(jié)構(gòu)元件以及長(zhǎng)4nt的末端反向重復(fù)序列,在其box D'和box D上游分別存在兩段長(zhǎng)14nt和10nt的與U2 snRNA前體互補(bǔ)的反義序列,理論推測(cè)它具有指導(dǎo)

3、U2 snRNA中U3和U11兩個(gè)位點(diǎn)2'-O-核糖甲基化的功能.這是首次在酵母中發(fā)現(xiàn)具有指導(dǎo)U2 snRNA 2'-O-核糖甲基化修飾的snoRNA,為酵母中指導(dǎo)snRNA核糖甲基化修飾的box C/D類snoRNA增加了新成員,為snoRNA進(jìn)一步的功能研究及U2 snRNA核糖甲基化修飾機(jī)制的研究提供了良好的遺傳分析體系.2.利用同源重組技術(shù),成功構(gòu)建了粟酒裂殖酵母mgU2-3/11 snoRNA基因缺失株.并用低濃度dNTP引物

4、延伸法證明了粟酒裂殖酵母mgU2-3/11 snoRNA指導(dǎo)U2 snRNA中Um3和Um11兩個(gè)位點(diǎn)2'-O-核糖甲基化修飾的形成.這是世界上首次用酵母遺傳缺失的方法證明了box C/D snoRNA具有指導(dǎo)U2 snRNA 2'-O-核糖甲基化修飾的功能,而mgU2-3/11 snoRNA還是已知的同時(shí)指導(dǎo)U2 snRNA中兩個(gè)位點(diǎn)2'-O-核糖甲基化修飾的第一個(gè)box C/D snoRNA分子.3.采用低濃度dNTP引物延伸法,發(fā)

5、現(xiàn)和鑒定了粟酒裂殖酵母U2 snRNA中的一個(gè)2'-O-核糖甲基化修飾新位點(diǎn)--Um3.同時(shí)指出粟酒裂殖酵母U2 snRNA中U9位的2'-O-核糖甲基化修飾并不存在.4.通過(guò)對(duì)粟酒裂殖酵母mgU2-3/11 snoRNA基因缺失株及野生株的溫度轉(zhuǎn)換生理實(shí)驗(yàn)分析,發(fā)現(xiàn)mgU2-3/11 snoRNA分子的缺失,雖然導(dǎo)致粟酒裂殖酵母U2snRNA中Um3及Um11的缺失,但卻對(duì)細(xì)胞中U2 snRNA的穩(wěn)定表達(dá)與代謝無(wú)明顯影響,對(duì)粟酒裂殖酵