miR-22和miR-200b對胃癌細胞生物學行為的影響及其機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討miR-22與miR-200b對人胃癌MGC-803細胞生物學行為的影響及分子機制。
　　方法：采用原位雜交實驗檢測89例胃癌組織及41例癌旁正常組織中miR-22與miR-200b的表達水平；采用熒光素酶報告載體系統(tǒng)檢測miR-22和miR-200b對Wnt-13’UTR熒光酶活性的影響；采用Western blot和qRT-PCR檢測miR-22和miR-200b對其調控靶基因的蛋白和mRNA表達變化；運用RNA干擾

2、技術沉默人胃癌MGC-803細胞中Wnt-1的表達；采用MTT法、細胞劃痕實驗、Transwell侵襲實驗以及AnnexinV-FITC和PI染色法檢測miR-22與miR-200b以及si-Wnt-1對人胃癌MGC-803細胞生物學行為的影響。
　　結果：原位雜交結果顯示，miR-22與miR-200b在胃癌組織中的表達水平相對比癌旁正常胃粘膜組織明顯下調，且兩者在胃癌組織中的表達呈正相關；在89例胃癌組織中，miR-22與mi

3、R-200b的表達水平與患者的臨床分期和淋巴結轉移呈負相關；熒光素報告載體系統(tǒng)證實Wnt-1是miR-22和miR-200b直接調控的共同靶基因；Western blot和qRT-PCR結果顯示，miR-22和miR-200b能下調Wnt-1的蛋白和mRNA表達水平；MTT檢測顯示，高表達miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌MGC-803細胞增殖，而miR-22或miR-200b抑制劑能部分逆轉si-Wnt-1對

4、人胃癌MGC-803細胞的增殖抑制作用，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；劃痕實驗結果顯示，高表達miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌MGC-803細胞遷移，而miR-22或miR-200b抑制劑能部分逆轉si-Wnt-1對人胃癌 MGC-803細胞的遷移抑制作用，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；Transwell侵襲實驗結果顯示，高表達miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可抑制人胃癌MGC-8

5、03細胞侵襲，而miR-22或miR-200b抑制劑能部分逆轉si-Wnt-1對人胃癌 MGC-803細胞的侵襲抑制作用，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；AnnexinV- FITC和PI染色法檢測結果顯示，高表達 miR-22和miR-200b或si-Wnt-1可誘導人胃癌MGC-803細胞發(fā)生凋亡，而miR-22或miR-200b抑制劑能部分逆轉si-Wnt-1對人胃癌MGC-803細胞的促凋亡作用，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.

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