氧化應(yīng)激在8-羥基喹啉銅致HepG2細(xì)胞的DNA損傷中的作用.pdf

1、目的：8-羥基喹啉銅（Copper 8-quinolinolate，CuQ）是一種銅離子殺菌劑，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用廣泛，可用于預(yù)防和控制真菌引起的農(nóng)業(yè)病害。CuQ性質(zhì)穩(wěn)定，將其噴灑于蔬菜、水果等農(nóng)作物表面，會(huì)有一定殘留。CuQ還是一種常用的防腐劑，與水果、蔬菜和其他食物直接接觸的木質(zhì)容器或包裝內(nèi)也常有CuQ存在。 國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（International Agency for Research on Cancer，IARC）將

2、CuQ對(duì)人類致癌性歸為第三類，即現(xiàn)有證據(jù)尚不能就其對(duì)人類致癌性進(jìn)行分類。CuQ對(duì)人類的致癌性有待進(jìn)一步研究。已有體外實(shí)驗(yàn)表明，在S-9存在的條件下，CuQ對(duì)TA97、TA100、TA102菌株具有致突變作用，提示CuQ可能具有遺傳毒性。肝臟是CuQ的主要代謝器官和蓄積部位，體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示CuQ可以造成肝臟損傷。本文試探討CuQ是否可以引起人源肝細(xì)胞的遺傳毒性及其相關(guān)機(jī)制。本研究選用人肝癌細(xì)胞系（HepG2）作為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。HepG2細(xì)胞

3、保留了人類正常肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的許多功能，還保留了生物轉(zhuǎn)化Ⅰ相酶和Ⅱ相酶的活性，被認(rèn)為是檢測(cè)外來(lái)化合物遺傳毒性的理想細(xì)胞系。 本研究選用HepG2細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)體系，探討CuQ所致人源肝細(xì)胞的DNA損傷及可能的機(jī)制，旨在為評(píng)估CuQ對(duì)人類健康的危害程度提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：以HepG2細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。通過(guò)單細(xì)胞凝膠電泳（SCGE）試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞DNA損傷。為探討DNA損傷的可能機(jī)制，用可見(jiàn)光分光光度法測(cè)定過(guò)氧化氫酶活性，

4、以苯二醛（OPT）測(cè)定細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽（GSH）水平，用硫代巴比妥酸反應(yīng)物（TBARS）測(cè)定法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化水平，以免疫印記法（western blot）檢測(cè)細(xì)胞核因子NF-κB的變化，以免疫組化方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）的表達(dá)水平，采用DL-甲硫氨酸磺酰亞胺（BSO）干預(yù)法來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)GSH水平對(duì)CuQ所致DNA損傷效應(yīng)的影響。 結(jié)果：HepG2細(xì)胞與0．5μM-4μM的CuQ接觸1h后，DNA的遷移距

5、離明顯增加，且呈劑量依賴關(guān)系，提示CuQ可引起DNA鏈斷裂。4μM的CuQ可以明顯降低細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫酶活性。CuQ作用于HepG2細(xì)胞1h可引起細(xì)胞內(nèi)GSH的耗竭。2μM-4μM的CuQ可引起細(xì)胞內(nèi)TBARS增多。伴隨劑量的增加及染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞核因子NF-κB由細(xì)胞漿逐漸轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核。2μM-4μM的CuQ可引起細(xì)胞內(nèi)TBARS增多。1μM-4μM的CuQ作用于HepG2細(xì)胞3h后，8-OHdG表達(dá)水平增強(qiáng)，與對(duì)照組比較，其差別具