熱休克蛋白70在肝移植急性排斥反應(yīng)發(fā)生中的作用及預(yù)測(cè)診斷價(jià)值.pdf

1、急性排斥反應(yīng)是肝移植術(shù)后常見的并發(fā)癥和死亡原因，也是導(dǎo)致移植肝無功能的重要因素之一，嚴(yán)重阻礙著器官移植的發(fā)展。但迄今為止其發(fā)生機(jī)理仍不明確，確診尚需依賴組織活檢。然而移植器官在組織學(xué)改變出現(xiàn)之前，已遭受了嚴(yán)重?fù)p傷。如何能夠早期預(yù)測(cè)排斥反應(yīng)的發(fā)生，目前尚無可靠方法。近年來研究發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白70(heatshockprotein70，Hsp70)與免疫反應(yīng)廣泛聯(lián)系，具有免疫調(diào)控作用并參與活化細(xì)胞因子，其在免疫反應(yīng)中的作用日益受到重視。本研

2、究擬建立并改進(jìn)現(xiàn)有大鼠肝移植模型，觀察其術(shù)后急性排斥反應(yīng)發(fā)生的規(guī)律，并研究在動(dòng)物模型及人體肝移植術(shù)后不同情況下移植肝臟Hsp70的表達(dá)，探討其在急性排斥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)理及早期診斷價(jià)值，為肝移植術(shù)后預(yù)測(cè)急性排斥反應(yīng)尋找可靠而準(zhǔn)確的診斷方法。 第一部分供肝快速切取法在大鼠原位肝移植模型中的應(yīng)用 目的改進(jìn)兩套袖法大鼠原位肝移植模型，將供肝快速切取技術(shù)應(yīng)用于手術(shù)中，研究其穩(wěn)定性及模型成功率。方法健康雄性SD大鼠200只，

3、隨機(jī)分為兩組。實(shí)驗(yàn)組采取供肝快速切取法原位肝移植，對(duì)照組采用傳統(tǒng)肝移植方法。比較兩組的手術(shù)時(shí)間，供肝冷、熱缺血時(shí)間，術(shù)后受體肝功能變化及手術(shù)成功率。結(jié)果對(duì)照組供體手術(shù)時(shí)間(33.8±4.2)min，供肝熱缺血時(shí)間(3.5±1.2)min，冷缺血時(shí)間(62.0±4.2)min，手術(shù)成功率80％。實(shí)驗(yàn)組供肝切取時(shí)間(13.1±2.2)min，供肝熱缺血時(shí)間0min，冷缺血時(shí)間(38.0±3.1)min，術(shù)后肝功能恢復(fù)快，手術(shù)成功率94％(P

4、＜0.05)。結(jié)論新的建模方法可明顯縮短手術(shù)時(shí)間，改善供肝質(zhì)量，提高手術(shù)成功率。本法為肝移植基礎(chǔ)研究提供了更為科學(xué)的模型。 第二部分熱休克蛋白70在大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)中的表達(dá)及預(yù)測(cè)診斷意義 目的探討Hsp70在大鼠肝移植術(shù)后的表達(dá)規(guī)律及對(duì)急性排斥反應(yīng)的預(yù)測(cè)診斷意義。方法改良“二套袖法”建立大鼠原位肝移植模型，隨機(jī)分為三組。對(duì)照組：Wistar大鼠至Wister大鼠原位肝移植；實(shí)驗(yàn)組：SD大鼠至Wistar大鼠原位肝臟

5、移植；治療組：SD大鼠至Wistar大鼠原位肝臟移植，術(shù)后肌注FK506(Tacrolimus)(2mg/kg/d)。三組分別于術(shù)后3、5、7天隨機(jī)處死5只大鼠，取移植肝臟觀察組織病理變化，免疫組織化學(xué)及RT-PCR法檢測(cè)肝臟Hsp70的表達(dá)，并分析其與急性排斥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展的相互關(guān)系。結(jié)果對(duì)照組術(shù)后無排斥反應(yīng)出現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后第三天出現(xiàn)典型排斥病理變化，隨時(shí)間推移排斥反應(yīng)活動(dòng)度積分(RAT)逐漸升高(P＜0.05)，治療組表現(xiàn)為無排斥反應(yīng)

6、或交界性排斥反應(yīng)；對(duì)照組移植肝臟Hsp70的表達(dá)在術(shù)后出現(xiàn)短暫升高后迅速降低(P＜0.05)，實(shí)驗(yàn)組肝臟Hsp70的表達(dá)水平較對(duì)照組高并隨時(shí)間發(fā)展而逐漸升高(P＜0.01)，與肝組織RAI之間存在著明顯的正相關(guān)(P＜0.01)；治療組肝臟Hsp70術(shù)后不同時(shí)間均呈低表達(dá)。結(jié)論移植肝組織中Hsp70的表達(dá)與急性排斥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)并對(duì)其有一定的預(yù)測(cè)診斷意義。 第三部分人肝移植術(shù)后熱休克蛋白70表達(dá)的初步觀察 目的觀察人

7、肝移植術(shù)后Hsp70的表達(dá)，探討其與急性排斥反應(yīng)的相互關(guān)系。方法選取15份移植術(shù)后肝臟穿刺標(biāo)本，根據(jù)組織病理改變分為1、對(duì)照組(無排斥反應(yīng))；2、輕度急性排斥反應(yīng)組；3、中/重度急性排斥反應(yīng)組。進(jìn)行Hsp70免疫組織化學(xué)染色和圖像分析。結(jié)果移植術(shù)后三組肝臟組織均有Hsp70表達(dá)，主要定位于肝細(xì)胞胞漿中。免疫組化Hsp70累積光密度(IOD)分析提示：對(duì)照組IOD為(30.99±11.14)，明顯低于輕度急性排斥反應(yīng)組(68.84±21.

8、37)和中/重度急性排斥組(71.82±19.99)(P＜0.01，F(xiàn)=7.927)；中/重度急性排斥反應(yīng)組IOD高于輕度急性排斥反應(yīng)組(P＜0.01)。結(jié)論Hsp70對(duì)移植肝臟具有保護(hù)作用，其表達(dá)持續(xù)增高與急性排斥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。 小結(jié)1、本研究改進(jìn)了現(xiàn)有的兩套袖法大鼠原位肝移植技術(shù)，分析總結(jié)了影響手術(shù)成功的關(guān)鍵因素，同時(shí)將供肝快速切取技術(shù)應(yīng)用于大鼠原位肝移植模型中，簡(jiǎn)化了手術(shù)操作，明顯縮短了手術(shù)時(shí)間，提高了成功率。術(shù)后

9、動(dòng)物存活率高，手術(shù)重復(fù)性好，便于推廣普及，為肝移植基礎(chǔ)研究提供了穩(wěn)定可靠的動(dòng)物模型。 2、觀察了SD大鼠至Wistar大鼠肝移植術(shù)后排斥反應(yīng)發(fā)生的規(guī)律，進(jìn)一步證實(shí)了SD至Wistar大鼠的肝移植組合排斥反應(yīng)發(fā)生率高，模型穩(wěn)定，價(jià)格便宜，是理想的研究移植排斥及移植免疫耐受的動(dòng)物模型。 3、證實(shí)了Hsp70在大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)發(fā)生中的重要意義。Hsp70在排斥反應(yīng)發(fā)生的早期階段表達(dá)于移植肝臟中，其表達(dá)持續(xù)升高預(yù)示急性排斥