不同時(shí)間負(fù)載抗原的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的抗肝癌效應(yīng).pdf

1、理論背景：肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，死亡率居世界之首，嚴(yán)重威脅我國(guó)人民的生命健康。據(jù)1998年全國(guó)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)年報(bào)資料，我國(guó)城市男性肝癌的死亡率為30.40/10萬(wàn)，女性為10.60/10萬(wàn)，手術(shù)治療對(duì)早期患者有肯定效果，而對(duì)轉(zhuǎn)移或腹水形成后的患者，不僅手術(shù)困難，術(shù)后復(fù)發(fā)率也很高，放療、化療對(duì)肝癌的療效不能肯定，肝癌的臨床治療迫切需要新的方法。近年來(lái)，以免疫治療為代表的生物

2、治療作為腫瘤治療的第四模式日益受到重視，作為肝癌治療的重要輔助手段之一，生物治療已逐漸顯示出其獨(dú)特的優(yōu)越性。 樹突狀細(xì)胞(dendriticcells，DC)是已知體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職的抗原呈遞細(xì)胞(antigenpresentingcells，APC)。DC能有效的攝取，加工及呈遞抗原，并能刺激未致敏T細(xì)胞的增殖與活化，是啟動(dòng)、調(diào)控并維持體內(nèi)特異性免疫誘導(dǎo)的中心環(huán)節(jié)。制備腫瘤特異性DC腫瘤疫苗，可以有效的激發(fā)特異性的持久的腫瘤免

3、疫誘導(dǎo)。這已經(jīng)成為腫瘤免疫治療的一個(gè)熱點(diǎn)，并在臨床研究中取得了令人振奮的成果。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模航⒎€(wěn)定可靠的誘導(dǎo)DC的途徑及調(diào)控其成熟的方法；進(jìn)行肝癌樹突狀細(xì)胞免疫瘤苗的體外實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)不同時(shí)間應(yīng)用肝癌細(xì)胞凍融抗原負(fù)載樹突狀細(xì)胞所誘導(dǎo)的抗肝癌效應(yīng)。 實(shí)驗(yàn)方法：采集健康足月剖宮產(chǎn)孕婦胎盤端臍血，分離臍血單核細(xì)胞(cordbloodmononuclearcell，CBMNC)及T淋巴細(xì)胞，用rhGM-CSF、rhIL-4及TNF-

4、a聯(lián)合誘導(dǎo)CBMNC分化為DC，并以流式細(xì)胞儀及免疫組織化學(xué)染色鑒定；在培養(yǎng)周期內(nèi)選取不同時(shí)間(第3、4、5、6、7天)用肝癌細(xì)胞凍融抗原負(fù)載CBMNC-DC，以不同時(shí)間負(fù)載抗原的DC刺激自體淋巴細(xì)胞活化為CTL，并用CTL對(duì)肝癌細(xì)胞進(jìn)行殺傷，MTT測(cè)定活化的自體淋巴細(xì)胞的相對(duì)數(shù)量和CTL對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷效果。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1、CBMNC在細(xì)胞因子rhGM-CSF，IL-4及TNF-a配伍作用下體外誘導(dǎo)分化為具有典型形態(tài)和表型的D