腺病毒siRNA干擾抑制RhoA基因及聯(lián)合TNF-α增加肝癌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的:RhoA基因在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，參與腫瘤細(xì)胞的凋亡、侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建RhoA基因的腺病毒RNA干擾系統(tǒng)，并聯(lián)合TNF-α藥物觀察誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡情況。一方面探討RhoA基因在肝癌細(xì)胞中的功能和作用，另一方面為腫瘤藥物聯(lián)合治療提供新的研究方向。
　　 方法:在本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建RhoAsiRNA質(zhì)粒的基礎(chǔ)上，構(gòu)建RhoA一腺病毒siRNA--AdsiRNA-RhoA。制各的重組腺

2、病毒，.感染HepG2細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR和Westernblot技術(shù)檢測(cè)重組腺病毒對(duì)HepG2細(xì)胞中RhoA基因表達(dá)的影響。單獨(dú)應(yīng)用RhoA基因重組腺病毒以及聯(lián)合TNF-α分別作用于HepG2后，應(yīng)用MTT法檢測(cè)HepG2細(xì)胞的增殖情況，TUNEL反應(yīng)檢測(cè)HepG2細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果:根據(jù)酶切鑒定和序列分析，成功構(gòu)建RhoA基因的腺病毒siRNA。通過(guò)腺病毒siRNA作用，Westemblot檢測(cè)顯示，RhoA蛋白表

3、達(dá)抑制率為7648％;RT-PCR結(jié)果顯示，mRNA轉(zhuǎn)錄水平降低74.46％。表明構(gòu)建的siRNA腺病毒能明顯抑制RhoA基因的表達(dá)。使用RhoA基因的siRNA腺病毒并聯(lián)合TNF-α，MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果表明能夠有效抑制HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖;TUNEL檢測(cè)結(jié)果表明能使HepG2細(xì)胞凋亡明顯。
　　 結(jié)論:本研究成功建立了RhoA基因的siRNA腺病毒，以及聯(lián)合細(xì)胞因子TNF-α，提高了TNF-α誘導(dǎo)肝癌凋亡的作用，為今后探討