轉(zhuǎn)錄因子NF-κB對(duì)AGGF1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子NF-κB家族在許多基因的表達(dá)調(diào)控中起著重要作用，在淋巴細(xì)胞的活化和增殖過程，特別是在炎癥過程中，也都起著重要調(diào)控作用。NF-κB家族一共有5個(gè)成員，但只有p65、RelB以及c-Rel亞型具有轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域。通常在未激活的細(xì)胞中，NF-κB與其抑制蛋白IκB結(jié)合而失去活性并存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到刺激而被激活后，IκB被降解NF-κB被釋放并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核從而調(diào)控下游基因的轉(zhuǎn)錄。Quinacrine(QC)是一種抗瘧疾藥物，同

2、時(shí)也具備抗炎抑癌作用，實(shí)驗(yàn)研究中多用QC作為NF-κB的抑制劑使用。AGGF1是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)血管生成因子，而最近的研究中指出AGGF1可作為抗炎因子存在。AGGF1同時(shí)具備促腫瘤生長(zhǎng)和抑制腫瘤生長(zhǎng)的兩種對(duì)立的功能，這使得對(duì)其體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的研究變得尤為重要。在對(duì)AGGF1啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，其啟動(dòng)子區(qū)存在NF-κB的潛在結(jié)合位點(diǎn)。通過熒光素酶實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，p65能夠通過兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合到AGGF1啟動(dòng)子區(qū)并增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活

3、性。在過表達(dá)p65時(shí)，AGGF1啟動(dòng)子活性增強(qiáng)近30倍，而對(duì)其中兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行突變后，其活性顯著減弱，分別降低約61％和87%。且用sip65和QC處理后，AGGF1啟動(dòng)子活性也顯著減弱。在對(duì)AGGF1的RNA和蛋白表達(dá)量進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，p65能增強(qiáng)AGGF1的RNA量及蛋白表達(dá)量。過表達(dá)p65時(shí)，AGGF1的RNA表達(dá)量增加1.9倍且其蛋白量也有增多。而用sip65和QC處理后，AGGF1的RNA和蛋白表達(dá)量顯著減少。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，