GSH改善冷凍對(duì)精子氧化應(yīng)激損傷的初步研究.pdf

1、背景與目的:
　　 近年來(lái),隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,人們面對(duì)著逐漸加劇的精神壓力和及環(huán)境污染等一系列社會(huì)問(wèn)題,男性不育癥的發(fā)病率正成逐年上升的態(tài)勢(shì),而對(duì)精子進(jìn)行有效的冷凍可作為一種保存男性生育力的積極手段。輔助生殖技術(shù)近年來(lái)已有了長(zhǎng)足進(jìn)步,但對(duì)于不孕不育患者雙方,其成功率卻遠(yuǎn)無(wú)法達(dá)到他們所期盼。男性精子的質(zhì)量直接影響著臨床結(jié)局,這其中包含兩方面的意義,一是精子的數(shù)量和活力；二是精子中所含遺傳物質(zhì)的完整性。前者的檢測(cè)多見(jiàn)于精液常規(guī)檢查

2、、精子形態(tài)學(xué)分析檢查等,僅能體現(xiàn)精液的一般“質(zhì)量”,而無(wú)法直接體現(xiàn)精子所含遺傳物質(zhì)的完整性。近年來(lái),氧化應(yīng)激理論成為男性學(xué)研究中的一個(gè)熱門(mén)話題。少量、持續(xù)的活性氧((Reactive Oxygen Species,ROS)有利于維持細(xì)胞的正常功能,當(dāng)ROS過(guò)量時(shí)可可引起氧化應(yīng)激損傷((Oxidative Stress,OS),損害機(jī)體的氧化防御系統(tǒng)。精子膜含有大量的多聚脂肪酸,而細(xì)胞質(zhì)中的氧化物清除酶含量較低,決定了其更易于受到ROS誘

3、導(dǎo)的損傷。精液中的ROS主要來(lái)自于白細(xì)胞和未成熟的精子,在行輔助生殖技術(shù)時(shí),例如離心、冷凍-復(fù)蘇過(guò)程,可產(chǎn)生大量的活性氧對(duì)精子造成損傷,而使用受損后的精子行助孕,不僅會(huì)降低臨床結(jié)局,甚至可對(duì)后代產(chǎn)生嚴(yán)重影響,故對(duì)精子損傷進(jìn)行有效的檢查,可早期篩選對(duì)后代致畸的風(fēng)險(xiǎn),這對(duì)于臨床尤為重要。
　　 谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸以肽鍵形式縮合而成的一種化合物,廣泛存在于有機(jī)體中。它可以運(yùn)輸氨基酸通過(guò)細(xì)胞膜,且GSH的-S

4、H基可保護(hù)細(xì)胞膜上的高度不飽和脂肪酸免遭氧化,在細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷中發(fā)揮著重要的作用[1]。它既可以作為谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的底物,清除細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)氧化物及過(guò)氧化氫,又可以單獨(dú)與自由基結(jié)合發(fā)揮自由基清除劑的作用。輔助生殖技術(shù)中常用的冷凍保護(hù)劑分為滲透性(甘油、乙二醇、二甲亞砜)和非滲透性(氨基乙酸、蔗糖、乳糖)等,甘油仍然是人類精液冷凍保存首選的保護(hù)劑。一般分為單一甘油型、甘油復(fù)合型。甘油復(fù)合型冷凍保護(hù)液是以甘油為基礎(chǔ),加入蛋黃或白蛋白或

5、蔗糖等高分子物質(zhì),以及兩性離子緩沖系統(tǒng),這是目前應(yīng)用最為廣泛和成熟的冷凍保護(hù)液。然而,受高水平活性氧刺激的不育患者,精液冷凍復(fù)蘇效率往往不能令人十分滿意。本課題擬通過(guò)在冷凍復(fù)蘇過(guò)程中添加少量的GSH,研究其在保護(hù)精子抗冷凍-解凍過(guò)程中氧化應(yīng)激損傷的影響,及其臨床結(jié)局
　　 材料與方法::
　　 1.選擇2011年2月至2011年5月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心就診或擬行助孕的男性患者精液標(biāo)本,共計(jì)60份；
　　

6、 2.以血細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)每份精液標(biāo)本行常規(guī)檢查,包括:活力(a級(jí)+b級(jí))、活動(dòng)率及總密度；
　　 3.蘇木精-伊紅染色法行精子形態(tài)學(xué)分析,記錄正常形態(tài)精子比率;
　　 4.利用流式細(xì)胞儀測(cè)定TUNEL細(xì)胞陽(yáng)性比率作為反映精子DNA完整性的指標(biāo);
　　 5.采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法,測(cè)定MDA(丙二醛)的含量,作為精子膜脂類過(guò)氧化反應(yīng)程度的指標(biāo)；
　　 6.追蹤此60位患者在我中心行輔助生殖助孕的臨床

7、結(jié)局,包括女方取卵數(shù)、受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率；
　　 結(jié)果:
　　 1.冷凍可對(duì)精子造成一定的損傷,尤其是對(duì)重度少弱精組患者損傷較為明顯；加入GSH后復(fù)蘇,對(duì)輕度少弱精癥患者精液的抗氧化應(yīng)激損傷能力改善較為明顯;
　　 2.冷凍復(fù)蘇對(duì)大量吸煙患者精子的損傷明顯大于少量吸煙或不吸煙患者的精子,差異具有顯著性；但加入GSH后對(duì)其改善作用并不明顯；
　　 3.加入GSH后復(fù)蘇對(duì)既往曾有前列腺炎史患者精液抗氧

8、化應(yīng)激損傷的能力改善較大；
　　 4.在行IVF或ICSI助孕中,二者臨床結(jié)局無(wú)明顯差異性,其TUNEL細(xì)胞陽(yáng)性率和MDA含量亦無(wú)明顯差異；
　　 5.當(dāng)TUNEL細(xì)胞陽(yáng)性率超過(guò)65％時(shí),可大大影響臨床結(jié)局。
　　 結(jié)論::
　　 1.體內(nèi)長(zhǎng)期存在高水平活性氧刺激的不育患者,體外添加GSH并不能很好的改善精子抗氧化應(yīng)激損傷的能力；
　　 2.已存在有長(zhǎng)期受活性氧刺激的不育患者,進(jìn)入周期前,先行治療