體內(nèi)評價Period2對人膠質(zhì)瘤細胞生長的影響.pdf

1、目的:研究生物鐘基因Period2(Per2)在U343人膠質(zhì)瘤細胞過表達時,Per2基因?qū)θ四z質(zhì)瘤細胞生長的抑制作用及對增殖能力的影響。
　　方法:體外培養(yǎng)U343人膠質(zhì)瘤細胞,分成三組:分別為Per2基因過表達組,空載體組和U343空白對照組分別培養(yǎng);克隆Per2基因全長,構(gòu)建pcDNA3.1(+)per2真核表達質(zhì)粒,測序驗證(已完成);用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體,分別將pcDNA3.1(+)per2和p

2、cDNA3.1(+)分別轉(zhuǎn)入U343細胞內(nèi)構(gòu)建Per2基因過表達的U343-pcDNA3.1(+)per2細胞和空載體U343-pcDNA3.1(+)細胞。
　　購買SPF級(specific pathogen free)BALB/CNude遺傳背景裸鼠45只,雄性,4-5周齡,按統(tǒng)計學(xué)原則隨機分為三組,每組15只,分別將①Per2基因過表達U343-pcDNA3.1(+)per2細胞②空載體U343-pcDNA3.1(+)細胞③

3、U343細胞培養(yǎng)至對數(shù)期,常規(guī)消化細胞,取1×107個細胞(0.2ml),常規(guī)消毒皮膚后,用1ml注射器接種于裸鼠背部皮下,建立皮下移植瘤動物模型。
　　實驗組裸鼠共飼養(yǎng)21天,觀察移植瘤后各組裸鼠腫瘤生長情況和成瘤時間,至直徑約為0.2cm×0.2cm時視為成瘤,并記錄成瘤天數(shù);三組裸鼠每組每7天處死5只,取腫瘤組織并比較大小。
　　對取出的腫瘤組織脫水后石蠟包埋,HE染色法觀察各組腫瘤情況,PCNA免疫組織化學(xué)法檢測Pe

4、r2基因過表達組、空載體組和空白對照組腫瘤組織的增殖情況,進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:成功將真核質(zhì)粒pcDNA3.1(+)per2和pcDNA3.1(+)轉(zhuǎn)入U343人膠質(zhì)瘤細胞,構(gòu)建瞬時轉(zhuǎn)染的Per2基因過表達U343-pcDNA3.1(+)per2細胞和空載體U343-pcDNA3.1(+)細胞。成功建立Per2基因過表達組,空載體組和U343空白對照組的移植瘤裸鼠模型。
　　Per2基因過表達組成瘤時間為4.7±0.2

5、7天;空載體組成瘤時間為3.2±0.27天;U343空白對照組成瘤時間為3.5±0.35天,各組成瘤率均為100％。接種腫瘤細胞后7-14天,腫瘤生長明顯活躍、腫瘤體積迅速增大,Per2基因過表達組腫瘤組織較空質(zhì)粒組和U343空白對照組體積小,且兩兩比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。HE染色法顯示為腫瘤組織,PCNA免疫組化結(jié)果顯示:Per2基因過表達組腫瘤組織內(nèi)陽性表達減少,經(jīng)兩兩統(tǒng)計學(xué)比較結(jié)果顯示,Per2基因過表達組與空載體組、U