山羊痘病毒的血清學檢測與PCR鑒定.pdf

1、本文由四部分構成，一是制備了山羊痘正向間接血凝診斷試劑。二是采用自制的正向間接血凝診斷試劑(IHA)對貴州省鎮(zhèn)遠、德江2個地區(qū)及廣西省柳州市獸防站送檢的血清樣品進行了山羊痘免疫效果監(jiān)測。三是對山羊痘病變及山羊痘病毒進行了比較詳細的透射電鏡觀察。四是應用PCR技術檢測山羊痘病毒。主要試驗和結果如下： 1.通過Vero-E6細胞盲傳3代后觀察到有規(guī)律的CPE；細胞培養(yǎng)物瓊脂擴散試驗陽性；反向間接血凝試驗陽性；由此確定成功分離了一株貴

2、州山羊痘流行毒株，命名為LD毒株。通過硫酸銨鹽析、SephadexG-200柱層析純化山羊痘病毒，以病毒抗原致敏綿羊紅細胞制備了山羊痘正向間接血凝診斷試劑，進行了最佳試驗條件的摸索，并與瓊脂擴散試驗相比較，表明正向間接血凝試驗比瓊脂擴散試驗敏感性高。本次試驗制備的正向間接血凝試驗診斷液可用于獸醫(yī)臨床上進行快速診斷。 2.應用自制的山羊痘正向間接血凝診斷試劑對貴州省和廣西柳州市共604頭份山羊血清進行了抗體檢測。同時對三種山羊痘疫

3、苗進行了免疫效果比較，測定了山羊痘疫苗的免疫抗體消長規(guī)律、免疫保護期，對皮內、皮下、肌肉接種疫苗的免疫效果進行了比較，試驗結果顯示山羊痘弱毒疫苗免疫后7～8d可檢測出抗體，皮內、皮下注射接種方式的免疫效果優(yōu)于肌肉注射。制定了對山羊痘病在貴州省的防疫工作具有一定的指導意義的免疫程序：使用B組疫苗，采用皮內注射方式對山羊進行免疫，產(chǎn)生抗體的時間較快，水平較高，維持時間可達196d以上。 3.對山羊痘病變及山羊痘病毒進行了比較詳細的透

4、射電鏡觀察。在感染的皮膚和肺上皮細胞的胞漿內發(fā)現(xiàn)有大量不同成熟階段的典型的山羊痘病毒顆粒。病毒顆粒也可見于巨噬細胞、成纖維細胞、血管內皮細胞的胞漿內，甚至少量在血管腔內。有髓神經(jīng)纖維也被病毒和被感染的巨噬細胞所波及。在山羊痘痘疹材料感染的雞胚絨毛尿囊膜痘斑的上皮細胞和成纖維細胞以及感染的Vero-E6細胞中也可見成熟和不成熟的病毒顆粒。 4.建立了山羊痘的PCR檢測方法。用特異性引物擴增出山羊痘弱毒疫苗和皮膚痘疹病毒P32基因，