急性肺損傷肺水通道蛋白-1、5的表達(dá)及功能的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:急性肺損傷(ALI)是以通透性肺水腫為特征的一種臨床綜合征,其嚴(yán)重階段即急性呼吸窘迫綜合征(ARDS).目前ALI/ARDS發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明.以往人們普遍認(rèn)為,肺水腫主要是由于肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(PMEC)受損所致,而對(duì)肺組織存在的水通道蛋白(AQPs)在病理生理?xiàng)l件下的作用認(rèn)識(shí)不足.在ALI/ARDS中水通道蛋白-1(AQP-1)和水通道蛋白-5(AQP-5)在基因、蛋白水平的表達(dá)以及液體轉(zhuǎn)運(yùn)功能的變化缺乏研究,其對(duì)肺水腫形成

2、的影響尚不清楚.為此,該研究圍繞大鼠PMEC,觀察脂多糖(LPS)、腫瘤壞死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β對(duì)AQP-1表達(dá)和功能的影響;并進(jìn)一步在LPS誘發(fā)的大鼠ALI模型觀察AQP-1、5表達(dá)的變化,從新的角度探討ARDS的發(fā)病機(jī)理.方法:1.采用該所建立的方法培養(yǎng)大鼠PMEC.隨機(jī)將PMEC分為DMEM對(duì)照組、LPS組、TNF-α組、IL-1β組.應(yīng)用半定量RT-PCR方法測定AQP-1mRNA的表達(dá)水平以及免疫細(xì)胞化學(xué)染

3、色測定AQP-1蛋白表達(dá)水平;同時(shí)采用同位素示蹤法測定PMEC內(nèi)氚水(<'3>H<,2>O)的放射強(qiáng)度.2.建立LPS誘發(fā)的大鼠ALI模型.隨機(jī)將動(dòng)物分為生理鹽水對(duì)照組、LPS2h組、LPS4h組、LPS6h組、LPS8h組.應(yīng)用半定量RT-PCR方法測定AQP-1mRNA、AQP-5mRNA的表達(dá)水平以及免疫組織化學(xué)染色測定AQP-1蛋白、AQP-5蛋白表達(dá)水平.結(jié)果:1.在靜息狀態(tài)下,PMEC表達(dá)高水平的AQP-1mRNA和AQP-

4、1蛋白,LPS、TNF-α、IL-1β刺激后,PMEC AQP-1表達(dá)顯著下降(p<0.01).2.在靜息狀態(tài)下,PMEC內(nèi)摻入一定量的<'3>H<,2>O,LPS、TNF-α、IL-1β刺激后, PMEC內(nèi)<'3>H<,2>O摻入量顯著降低(p<0.01).3.在生理鹽水對(duì)照組,正常肺組織表達(dá)高水平AQP-1mRNA和AQP-1蛋白,在ALI大鼠,肺組織AQP-1mRNA和AQP-1蛋白表達(dá)顯著下降(p<0.01).4.在生理鹽水對(duì)照

5、組,正常肺組織表達(dá)高水平AQP-5mRNA和AQP-5蛋白,在ALI大鼠,肺組織AQP-5 mRNA和AQP-5蛋白表達(dá)顯著降低(p<0.01).結(jié)論: 1.LPS、TNF-α、IL-1β可下調(diào)PMEC AQP-1mRNA和AQP-1蛋白表達(dá),由此推測病理?xiàng)l件下AQP-1表達(dá)下調(diào),導(dǎo)致肺泡-毛細(xì)血管間水通透性下降,可能與肺水腫的發(fā)病機(jī)理有關(guān).2.LPS、TNF-α、IL-1β可降低PMEC內(nèi)<'3>H<,2>O摻入,提示炎癥刺激下AQP