應(yīng)用microRNA微陣列技術(shù)研究乳腺癌microRNA的差異表達(dá)譜.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。近年來，乳腺癌發(fā)病率不斷上升，嚴(yán)重危害女性健康。然而乳腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制至今仍不清楚，進(jìn)一步探索乳腺癌的分子發(fā)生機(jī)制對提高乳腺癌診斷與治療水平有重要意義。 miRNA(MicroRNA)是一類長約19-25nt的單鏈非編碼RNA，廣泛存在于動、植物中，具有物種及組織特異性，進(jìn)化上高度保守。miRNA可與其靶mRNA的3’非翻譯區(qū)(3’untranslatedregions，3’-UTRs)特

2、異性結(jié)合，引起靶mRNA的翻譯抑制或降解，在細(xì)胞的生長、分化及死亡過程中發(fā)揮重要作用。MiRNA的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生相關(guān)，可能起到癌基因或抑癌基因的作用。 本研究擬采用miRNA微陣列技術(shù)篩選乳腺癌組織差異表達(dá)的miRNAs，并探討其與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，以期為闡明miRNA在乳腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制中的作用提供新的依據(jù)。 材料和方法： 收集2005年11月至2006年3月在中山大學(xué)腫瘤防治中心手術(shù)切除的8例

3、乳腺癌新鮮標(biāo)本，病理組織學(xué)確診為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌；分別取癌旁組織(距癌組織大于2cm)及癌組織，Trizol法抽提總RNA后，用Ambion’SmiRNAIsolationKit分離出miRNA；將Cy3y熒光標(biāo)記的miRNA進(jìn)行miRNA微陣列芯片雜交反應(yīng)；采集芯片原始信號值并將圖像信號轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號，對每個(gè)miRNA的信號值取均值，導(dǎo)入Cluster3.0進(jìn)行聚類分析；應(yīng)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法驗(yàn)證miRNA芯片結(jié)果的可靠性。

4、 結(jié)果： 聚類結(jié)果顯示，相對于癌旁組織，乳腺癌組織中miR-21、miR-29a、miR-29b、miR-29c、miR-365、miR-155、miR-98、let-7g表達(dá)上調(diào)，miR-320、miR-497、miR-422b、miR-361、miR-191、miR-17-3p表達(dá)下調(diào)。 挑選miR-21、miR-125b、miR-137、miR-145、miR-376a和miR-497在標(biāo)本60T和1P(60T

5、和1P是配對的癌及癌旁組織)進(jìn)行定量RT-PCR驗(yàn)證，同時(shí)進(jìn)行U6擴(kuò)增作為內(nèi)參。在樣本60T和1P中的CP值分別為：U6(15.0；15.8)，miR-21(13.4；14.7)，miR-125b(17.6；16.2)，miR-137(31.9；29.2)，miR-145(20.2；18.7)，miR-376a(22.6；21.4)，miR-497(24.3；22.1)。融解曲線顯示單峰，定量RT-PCR產(chǎn)物凝膠電泳顯示單一特異性條帶，

6、表明具有良好擴(kuò)增特異性。將定量RT-PCR和miRNA芯片結(jié)果進(jìn)行歸一化處理后顯示定量RT-PCR與miRNA芯片結(jié)果一致性較好。 結(jié)論： 1.乳腺癌組織中miR-21、miR-29a、miR-29b、miR-29c、miR-365、miR-155、miR-98、let-7g表達(dá)上調(diào)，miR-320、miR-497、miR-422b、miR-361、miR-191、miR-17-3p表達(dá)下調(diào)；提示上述miRNAs的表達(dá)異