梨火疫病菌群體感應(yīng)相關(guān)基因luxS的功能分析.pdf

1、由梨火疫病菌Erwinia amylovora引起的薔薇科植物的火疫病是一類(lèi)毀滅性的細(xì)菌病害，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)危害。為了有效防治病害的發(fā)生及危害，人們對(duì)其致病因子的分子機(jī)理作了大量的研究。而許多植物病原細(xì)菌毒性因子的產(chǎn)生都依賴(lài)于群體感應(yīng)( quorum sensing，QS)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。 LuxS蛋白參與細(xì)菌群體感應(yīng)信號(hào)分子autoinducer-2(AI-2)合成的最后一步。本研究在實(shí)驗(yàn)室已有的研究基礎(chǔ)上構(gòu)建了Erwinia

2、amylovora strainNCPPB1665(Era NCPPB1665)的luxS突變體(Ea△ luxS)并且對(duì)突變體的表型進(jìn)行了初步的分析。研究發(fā)現(xiàn)Ea△luxS影響細(xì)菌的游動(dòng)性、胞外多糖的分泌以及對(duì)雙氧水的耐受能力。分別將Era NCPPB1665、Ea△luxS、功能互補(bǔ)菌株Ea△luxS(pPRO-luxS)和空載體對(duì)照EaAluxS( pPROEXHta)接種梨樹(shù)葉柄，發(fā)現(xiàn)接種突變體Ea△luxS和空載體對(duì)照Ea△l

3、uxS( pPROEXHta)的葉片發(fā)病情況比野生型和功能互補(bǔ)菌株Ea△luxS(pPRO-luxS)明顯降低。這表明luxS基因影響Era NCPPB1665重要毒性基因的表達(dá)，因此，干擾luxS基因的表達(dá)可能能成為控制梨火疫病菌的一種潛在方式。 為了進(jìn)一步明確luxS基-因是否影響Era NCPPB1665中hrp基因的表達(dá)，我們?cè)贓 amylovora Ea321的致病島中挑選了八個(gè)hrp相關(guān)基因，分別為dspE、hrpW

4、、hrpA、hrpB、hrcJ、hrpL、hrpJ、hrpY。同時(shí)，根據(jù)Sanger Institute(www.sanger.ac.uk)網(wǎng)站中公布的E amylovora基因組序列，對(duì)八個(gè)相關(guān)基因分別設(shè)計(jì)引物。提取野生型Era. NCPPB1665、突變體Ea△luxS、功能互補(bǔ)菌株EaAluxS(pPRO-luxS)和空載體對(duì)照Ea△luxS(pPROEXHta)的總RNA，利用反轉(zhuǎn)錄差異顯示技術(shù)研究luxS基因?qū)Π藗€(gè)hrp相關(guān)基