仿刺參縱肌帶的再生及相關(guān)基因表達(dá)分析.pdf

1、分類號(hào)分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)碩士學(xué)位論文仿刺參縱肌帶仿刺參縱肌帶的再生及相關(guān)基因表達(dá)分析再生及相關(guān)基因表達(dá)分析趙麗娜1014031指導(dǎo)教師姓名李霞（教授）專業(yè)名稱水產(chǎn)養(yǎng)殖論文答辯日期2013年6月7日學(xué)位授予日期2013年6月摘要I摘要仿刺參在不良環(huán)境條件下，如海水污染、水溫過高、過分密集或某些強(qiáng)烈的刺激時(shí)，會(huì)引發(fā)身體收縮，泄殖腔破裂，把部分或全部內(nèi)臟排出體外。這是仿刺參抵御敵害和應(yīng)激環(huán)境的一種自保措施，它們有較強(qiáng)的再生能力，去除體內(nèi)的某

2、些器官之后并不會(huì)死亡，而能完整的再生出新的器官。由于仿刺參這種很強(qiáng)的器官再生和修復(fù)能力，及其在生物分類上重要的進(jìn)化地位，研究仿刺參的再生機(jī)制具有很高的科研價(jià)值，對(duì)于高等生物的細(xì)胞分化與增殖、組織修復(fù)機(jī)制有重要意義。(1)以仿刺參為試驗(yàn)材料參考人類外科縫合技術(shù)，嘗試對(duì)仿刺參手術(shù)部位進(jìn)行縫合，建立了一種海參體壁手術(shù)縫合的方法。結(jié)果取得理想效果，有效解決了海參創(chuàng)傷后傷口難以愈合、化皮死亡的問題。將仿刺參放在盛有0.54molL的硫酸鎂溶液的解

3、剖盤中麻醉1h，然后用滅菌手術(shù)刀沿腹部后13處往前縱向切開約2cm切口，深至體腔。采用單純對(duì)合縫合法進(jìn)行縫合，縫合后放回加有100IUml的青霉素和100?gml的鏈霉素的抗生素的水槽中培育。結(jié)果：試驗(yàn)組仿刺參縫合后，創(chuàng)口在10d時(shí)已基本愈合，20d時(shí)與正常組織沒有區(qū)別，且在培育過程中，化皮率10%，死亡率僅5%；對(duì)照組未經(jīng)縫合，其創(chuàng)口愈合時(shí)間較試驗(yàn)組平均慢10d，且化皮率高達(dá)58.7%，死亡率51.7%。該方法可應(yīng)用到海參的創(chuàng)傷實(shí)驗(yàn)研

4、究以及養(yǎng)殖生產(chǎn)中。(2)采用人工創(chuàng)傷的方法先將仿刺參腹部剖開1cm左右傷口，用剪刀橫向剪斷體腔背部的縱肌帶(longitudinalmusclebsLMBs)，然后對(duì)傷口進(jìn)行縫合，并將創(chuàng)傷仿刺參在添加抗生素（100IUml的青霉素和100ugml的鏈霉素）的海水中繼續(xù)飼養(yǎng)。用組織切片的方法觀察仿刺參縱肌帶再生的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)的變化。再生的形態(tài)學(xué)變化是創(chuàng)傷時(shí)，由于縱肌帶的收縮，斷端出現(xiàn)0.5cm1cm的間隙；創(chuàng)傷15d，創(chuàng)傷處出現(xiàn)乳白色絮

5、狀組織，暫命名為肌前組織；創(chuàng)傷3045d時(shí)，肌前組織逐漸增厚并將斷端肌肉組織連接起來；創(chuàng)傷6090d，肌前組織已轉(zhuǎn)化成縱肌帶，并且其厚度增至約正?？v肌帶的12；創(chuàng)傷后110130d，新生縱肌帶進(jìn)一步增粗，形態(tài)上與未創(chuàng)傷處組織沒有區(qū)別，只是直徑略小一些；創(chuàng)傷150d時(shí)，再生的縱肌帶增厚至正常狀態(tài)。其組織學(xué)變化過程為創(chuàng)傷后15d，在損傷處出現(xiàn)結(jié)締組織及單個(gè)的肌纖維形成一條不規(guī)則的細(xì)長的條帶，即肌前組織；創(chuàng)傷后3045d，肌前組織層增厚，并與

6、體壁間形成一些通道，通道由結(jié)締組織和體腔上皮細(xì)胞組成，結(jié)締組織中肌纖維的數(shù)量大量增加；創(chuàng)傷后6090d，肌前組織明顯增粗，幾乎被肌纖維占據(jù)，且通道數(shù)量增加，此時(shí)肌前組織已轉(zhuǎn)化為肌肉帶（縱肌帶）；創(chuàng)傷后110130d，新生肌纖維數(shù)量大量增加，和體壁相連的通道數(shù)量減少，創(chuàng)傷150d，新生的縱肌帶基本達(dá)到正常的結(jié)構(gòu)，且通道基本消失。分析認(rèn)為新生的肌細(xì)胞來源于體壁結(jié)締組織細(xì)胞和體腔上皮細(xì)胞。(3)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)仿刺參延伸因子1α（el