幽門螺桿菌疫苗

1、幽門螺桿菌疫苗,杜薇 2017.08.31,目錄,01,背景,02,03,04,檢索方法,文獻內(nèi)容,總結(jié),第 1 部分,背景,幽門螺桿菌,“,背景,是一種螺旋形、微需氧、對生長條件要求十分苛刻的革蘭氏陰性桿菌。1983年首次從慢性活動性胃炎患者的胃粘膜活檢組織中分離成功，是目前所知能夠在人胃中生存的唯一微生物種類。幽門螺旋桿菌病包括由幽門螺旋桿菌感染引起的胃炎、消化道潰瘍、淋巴增生性胃淋巴瘤等。幽門螺旋桿菌病的不良預(yù)后是胃癌,

2、【陳述９】有效的幽門螺桿菌疫苗將是預(yù)防感染的最佳措施。證據(jù)質(zhì)量：低。推薦強度：強。共識水平：100％。,第五次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告 2017,第 2 部分,檢索方法,,,,,,PubMed 中國知網(wǎng),英文、中文各800+,Helicobacter pylori vaccine幽門螺桿菌疫苗,檢索方法,檢索工具,檢索結(jié)果,關(guān)鍵詞,第 3 部分,文獻內(nèi)容,第一篇,知識拓展,與抗原同時或預(yù)先應(yīng)用，能夠增強機體針對抗原的免疫應(yīng)

3、答能力，或改變免疫反應(yīng)類型的制劑,01,免疫佐劑定義,02,使用免疫佐劑的原因,可溶性純化蛋白質(zhì)疫苗或蛋白質(zhì)亞單位疫苗的免疫激活作用通常較弱，不足以刺激機體產(chǎn)生足夠的抗體，因此通常在疫苗制劑中加入佐劑。與單獨應(yīng)用抗原相比，抗原與佐劑聯(lián)合應(yīng)用所需的抗原量較少，機體產(chǎn)生的抗體量較多，并且還可以減輕免疫耐受,佐劑的作用機理,,03,1、改變抗原物理性狀，延緩抗原降解和排除，延長體內(nèi)存留的時間，從而更有效的刺激免疫系統(tǒng)。2、 刺激單核巨噬細(xì)

4、胞增強其對抗原的處理和遞呈能力。3、 刺激淋巴細(xì)胞增生和分化，從而增強和擴大免疫應(yīng)答的效應(yīng)。4、改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。,04,理想佐劑的必備條件,1、安全，且無短期及長期的毒副作用。2、佐劑的化學(xué)成分和生物學(xué)形狀清楚，制備批間差異小且易于生產(chǎn)。3、與單獨使用抗原相比，佐劑與抗原聯(lián)用能刺激機體產(chǎn)生較強的免疫反應(yīng)。4、用較少的免疫劑量即可產(chǎn)生效力。5、保證液體劑型疫苗在較低的濃度下即可刺激機體產(chǎn)生較強的免疫應(yīng)

5、答。進入體內(nèi)的佐劑可自行降解且易于從體內(nèi)清除。6、價格低廉。,佐劑的分類,顆粒性佐劑 如氫氧化鋁佐劑 非顆粒性佐劑 如細(xì)胞因子本身具有免疫原性 如如百日咳桿菌、抗酸桿菌（結(jié)核分枝桿菌）以及革蘭陰性桿菌等本身不具有免疫原性 如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等來源于植物的佐劑，如皂甙和多糖類提取物等來源于病原微生物的佐劑，如單磷脂、霍亂毒素以及CpG寡聚脫氧核苷酸等,05,常用佐劑,鋁鹽佐劑是一類含Al離子的無機鹽佐

6、劑，主要有氫氧化鋁膠和明礬。氫氧化鋁膠，又稱為鋁膠，由于其生產(chǎn)成本低廉，使用方便，毒性極低。鋁鹽佐劑是第一個被批準(zhǔn)可用于人的佐劑。,1 鋁鹽佐劑,06,2 油性佐劑,弗氏佐劑( FA)、佐劑-65、白油Span佐劑 弗氏完全佐劑(FCA)是由低引力和低粘度的礦物油及乳化劑組成的一種貯藏性佐劑。弗氏不完全佐劑( FIA)是在不完全佐劑的基礎(chǔ)上加一定量的分枝桿菌而成。,3 微生物佐劑,短小棒狀桿菌(CP)　由CP經(jīng)加熱或甲醛滅活制成

7、,為非特異性免疫增強劑,對機體毒性低,沒有明顯的副作用?？ń槊?BCG)　最常用的微生物佐劑之一原是用來預(yù)防結(jié)核病的疫苗,在預(yù)防兒童結(jié)核病方面功效顯著。胞壁酰二酞(MDP)及其衍生物　MDP的成分是N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸-D-異谷氨酰胺,有很強的佐劑活性。被認(rèn)為是最有發(fā)展前途的佐劑之一。細(xì)菌脂多糖(LPS)　LPS可起到多克隆B細(xì)胞有絲分裂原的作用,也可促進巨噬細(xì)胞分泌單核因子。LPS由于具有毒性,所以不能直接成為人用疫苗的佐

8、劑單磷酰脂質(zhì)A(MLA)　MLA是一種毒性較低的具有佐劑活性的脂多糖衍生物?；魜y毒素(CT)　霍亂毒素是由霍亂弧菌分泌的分子量為84KD的一種不耐熱腸毒素,增強弱免疫原的免疫原性。,4 表面活性劑類佐劑,4-1免疫刺激復(fù)合物（ISCOM）1 組成 抗原物質(zhì)與由皂樹皮提取的一種糖苷Quil A及膽固醇按 1：1：1 混合后自發(fā)形成的一種具有較高免疫活性的脂質(zhì)小泡。每個小泡直徑40 nm，約含10～12個分子的蛋白質(zhì)2 作用方

9、式 ISCOM 能夠與抗原的疏水部分結(jié)合，從而將其親水部位暴露于免疫細(xì)胞，將抗原有效地遞呈給抗原提呈細(xì)胞，由于抗原遞呈細(xì)胞的內(nèi)體小泡和胞質(zhì)溶膠的雙重作用，含 ISCOM 的疫苗可以通過 MHC-Ⅰ和 MHC-Ⅱ兩種途徑將抗原遞呈給免疫系統(tǒng)，同時激活CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞4-2 脂質(zhì)體1 結(jié)構(gòu) ：類似生物膜，一般由磷脂和膽固醇形成的雙分子層包被目標(biāo)物形成的超微球狀制劑。2 特點：脂質(zhì)體注入體內(nèi)后能自然聚集到某些組織；

10、脂質(zhì)體可以通過接觸、吸附、吞噬、融合和脂質(zhì)交換等方式與細(xì)胞相互作用；脂質(zhì)體可以增加所攜帶藥物對淋巴系統(tǒng)的指向性和靶組織的滯留性，延緩藥物釋放，提高療效；無毒并且還可以降低藥物對正常細(xì)胞的毒性,5 分子佐劑,5-1 細(xì)胞因子化學(xué)組成 多屬小分子多肽或糖蛋白，是由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞經(jīng)刺激而合成、分泌的一類生物活性物質(zhì)。特點 對Th細(xì)胞的分化起重要作用,能增強自然殺傷細(xì)胞細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的功能,還有誘導(dǎo)其它細(xì)胞因子的產(chǎn)生,

11、對機體的免疫應(yīng)答具有廣泛的上調(diào)作用。分類：IL-2 一種重要的T細(xì)胞生長因子IL-12 由單核細(xì)胞和B細(xì)胞產(chǎn)生,具有多種生物活性, 是迄今所知誘導(dǎo)Th1型免疫應(yīng)答的最主要的細(xì)胞因子。IL-18 是最近發(fā)現(xiàn)的鼠和人的細(xì)胞因子,可誘導(dǎo)Th1細(xì)胞和NK細(xì)胞高效分泌IFN-γ,促進T細(xì)胞增生,與IL-12產(chǎn)生協(xié)同作用等。IL-15 主要由單核—巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,在哺乳動物一個主要的功能為調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的發(fā)育與增殖,通過NK細(xì)胞產(chǎn)生

12、IL-15共刺激細(xì)胞因子從而調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞間的相互作用。IFN-γ 是一種有效的免疫佐劑,它能協(xié)同IL-2誘導(dǎo)LAK活性、增強抗原呈遞,5-2 CpG序列(CpG）,CpG序列 一類其序列大部分以非甲基化的胞嘧啶核苷酸和鳥嘌呤核苷酸(CpG)為基元的寡聚體,由于這種特征性序列可激活多種免疫效應(yīng)細(xì)胞,故又被稱作免疫刺激DNA序列作用特點 可激活T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫活性細(xì)胞, 產(chǎn)生大量的多種細(xì)胞因子, 增強機體的特異

13、性和非特異性免疫效應(yīng)。優(yōu)點 CpG引起的免疫反應(yīng)以Th1型為主,因此可以很好的激發(fā)粘膜免疫反應(yīng)雖然CpG-DNA具有安全、有效等優(yōu)點。,6 化學(xué)物質(zhì),左旋咪唑　主要作用于T淋巴細(xì)胞。此外它還有恢復(fù)周圍效應(yīng)細(xì)胞的功能,既是免疫扶正劑又是免疫調(diào)節(jié)劑,不同免疫方法對重組幽門螺桿菌多靶點疫苗的免疫效果研究,重組幽門螺桿菌多靶點疫苗工程菌,,,,口服重組幽門螺桿菌疫苗Ⅰ、Ⅱ期臨床研究,鄒全明, 毛旭虎, 郭剛,等.,第二篇,題目,作者,雜志

14、,中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編(上冊). 2007,方法,血清檢驗結(jié)果,唾液檢驗結(jié)果,,糞便檢驗結(jié)果,,,結(jié)論,該疫苗在所試驗三種劑量下對人體均具有良好的安全性，未見明顯的毒副反應(yīng)。試驗各組疫苗均能刺激人體產(chǎn)生較高的血清特異性IgG抗體、血清特異性總Ig抗體且持續(xù)時間較長，在全程免疫后兩月仍處于較高的水平。此疫苗具有良好的安全性和免疫原性，3次免疫優(yōu)于2次免疫,,,,Efficacy, safety, and immun

15、ogenicity of an oral recombinant Helicobacter pylori vaccine in children in China: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial,Zeng M, Mao X H, Li J X, et al.,Lancet, 2015，影響因子：47.831,第三篇,題目,作者,雜志,實驗設(shè)計及

16、方法,江蘇省 4464名健康兒童 接受3次口服疫苗/安慰劑（隨機雙盲） 隨訪三年,藥品信息：疫苗是通過DNA重組技術(shù)開發(fā)的。每劑包含15mg尿素酶B亞單位和熱敏腸毒素B亞單位組成的融合蛋白接種時間：在第0、14和28天進行了口服疫苗接種接種方法：參與者禁食至少2小時，并在口服疫苗2分鐘前，喝80毫升的緩沖溶液，含2.8克碳酸氫鈉和1.1g的檸檬酸鈉。溶解在30毫升的25 - 30°C蒸餾水采集標(biāo)本

17、：血樣、唾液采集時間：服藥前、第三次服藥后1個月、6個月、12個月（免疫分析）不良反應(yīng)監(jiān)測：我們監(jiān)測參與者在每次服用后至少有30分鐘的不良反應(yīng)。在接下來的3天里，參與者或他們的監(jiān)護人在日記中記錄了包括發(fā)燒、頭痛、眩暈和一些胃腸疾病在內(nèi)的反應(yīng)。記錄嚴(yán)重的不良反應(yīng)。后期隨訪：我們在4、8、12個月的時間里拜訪了參與者，然后在第3次注射后的幾個月24和36個月，來評估幽門螺桿菌感染事件的發(fā)生。主要療效終點是接種疫苗后的12個月內(nèi)發(fā)生幽

18、門螺桿菌感染。繼發(fā)療效終點為隨訪期間幽門螺桿菌感染的發(fā)生。免疫原性終點：抗體幾何平均滴度(GMT)，增長率(四倍的抗體滴度)，以及血清IgG和唾液IgA對尿素的幾何平均滴度增加。安全終點：在每組中被請求的不良反應(yīng)和嚴(yán)重不良事件的發(fā)生率。,實驗設(shè)計及方法,結(jié)果,疫苗組,對照組,,,,疫苗組,安慰劑組,事件發(fā)生率 每年每百人,免疫效果,盡管免疫效果在第一年后減弱,但幽門螺桿疫苗顯著降低了感染事件的發(fā)生在整個研究期間。,(A)抗尿素酶B

19、亞單位特異性的血清IgG四倍增長率(B)唾液IgA四倍增長率,與安慰劑相比，幽門螺桿菌疫苗可明顯提高免疫應(yīng)答特異性抗體濃度很高，第一年內(nèi)沒有明顯減弱,安全性,腹脹,腹泄,胃痛,嘔吐,,第四篇,幽門螺桿菌疫苗的研究進展,1 Hp 疫苗的實驗研究Hp 疫苗有預(yù)防和控制感染的潛能，具有良好的開發(fā)前景，吸引國內(nèi)外研究者致力于疫苗的研究。從早期的全菌疫苗到后來的基因工程疫苗，研究較多的應(yīng)用于Hp 感染的疫苗主要有全菌疫苗、亞單位疫苗(

20、基因工程疫苗) 、核酸疫苗、聯(lián)合疫苗等。目前Hp 疫苗的研究大多處于臨床前階段，已進入臨床試驗的相對較少，實驗研究在尋求有效疫苗中發(fā)揮重要作用，為臨床試驗打下良好基礎(chǔ)。,,1. 1 全菌疫苗全菌疫苗是以全菌體作為免疫原接種 機體，產(chǎn)生高效的局部黏膜 免疫應(yīng)答。1.2 亞單位疫苗亞單位疫苗可由培養(yǎng)Hp 并分離的抗原蛋白或利用基因工程生產(chǎn)重組的抗原蛋白制成。分離Hp 抗原蛋白操作復(fù)雜，費時費力，不易獲取，但通過基因工程獲得的抗原蛋白結(jié)

21、構(gòu)簡單、成分清楚、安全性好和便于工業(yè)化大量生產(chǎn)，因而成為目前研究的重點。國內(nèi)外學(xué)者已先后通過各種實驗證實尿素酶是一種有效的保護性抗原，因其表達于所有Hp 中，是Hp 定植于胃黏膜必需的物質(zhì)，且具有高度保守序列，因此是研究最多、最理想的候選抗原; 尿素酶有A、B 兩個亞單位，其中尿素酶B 抗原性最強且有保護作用，是目前公認(rèn)的首選抗原分子［6-7］此外，也有研究發(fā)現(xiàn)，Hp熱激蛋白［9］、空泡毒素與細(xì)胞毒素相關(guān)基因A 蛋白［10］、過氧化氫酶

22、［11］等蛋白抗原對小鼠動物模型有保護性免疫作用。,內(nèi)容簡介,,1.3 核酸疫苗 核酸疫苗是指外源抗原基因直接轉(zhuǎn)移到真核表達載體內(nèi)，通過宿主合成抗原蛋白，并誘導(dǎo)針對該抗原蛋白的免疫反應(yīng)。核酸疫苗主要包括保護性抗原和真核表達載體，為一種新形式的疫苗，其在體內(nèi)不復(fù)制、不整合。研究結(jié)果表明，Hp 核酸疫苗同樣具有較強的免疫原性和免疫保護性。然而，核酸疫苗經(jīng)黏膜呈遞時易被核酸酶降解而失活，如何解決這個問題是核酸疫苗的一個重要問題。目

23、前，常采用帶正電的生物可降解材料包裹核酸疫苗來解決這一問題。包裹后形成的粒子在保護質(zhì)粒不被核酸酶等降解的同時，還能更有效地促進免疫應(yīng)答的發(fā)生。已有研究表明，殼聚糖納米粒作為基因呈遞載體顯示出良好的應(yīng)用前景。1.4 聯(lián)合疫苗 目前技術(shù)分離的抗原的抗原性較弱，單一抗原疫苗產(chǎn)生的效果較低，而多價疫苗效果明顯高于單價疫苗。故目前認(rèn)為應(yīng)用Hp 多個亞單位或者功能肽段構(gòu)建聯(lián)合疫苗，比單一成分構(gòu)建疫苗具有更強的免疫保護性。,內(nèi)容簡介,內(nèi)

24、容簡介,2 Hp 疫苗的免疫機制研究,Hp 自然感染會誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，卻不能清除Hp，而導(dǎo)致患者的Hp 感染慢性化，其原因是Hp 可通過多種機制逃避宿主免疫應(yīng)答，同時形成對Hp 感染的免疫耐受。研究證實，接種疫苗亦能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，不僅可減少細(xì)菌負(fù)荷量，還能夠預(yù)防感染［9， 20］。目前認(rèn)為Hp 自然感染誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答與接種疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答不同，疫苗有望根除Hp，但疫苗的免疫機制目前仍存在很多爭議，普遍認(rèn)為體液免疫和細(xì)胞

25、免疫均參與抗Hp 反應(yīng)。,內(nèi)容簡介,3 免疫佐劑與呈遞系統(tǒng),3. 1 免疫佐劑抗Hp 感染中，黏膜免疫是令人滿意的，但由于食物與共生微生物的存在，人體的免疫系統(tǒng)可以耐受大部分蛋白質(zhì)，同時Hp 抗原的免疫原性較低，單純用Hp 抗原免疫不能誘發(fā)足夠的抗Hp 感染的免疫應(yīng)答，故需應(yīng)用合適的佐劑來增強抗原的免疫原性，獲得理想的免疫效應(yīng)。Hp 免疫佐劑最常用的是大腸埃希菌不耐熱腸毒素和霍亂毒素，這些佐劑在動物實驗中顯示良好的耐受性，但在人體不良

26、反應(yīng)大，有學(xué)者應(yīng)用Hp 溶菌產(chǎn)物與大腸埃希菌不耐熱腸毒素雙突變體( Ｒ192G/L211A) 免疫小鼠，獲得與霍亂毒素作為佐劑相似的保護性免疫，近年來，也有一些學(xué)者應(yīng)用IL-2 為佐劑，發(fā)現(xiàn)其可提高免疫保護率［33-34］。也有研究發(fā)現(xiàn)，以氧化鋁為基礎(chǔ)的疫苗誘導(dǎo)小鼠可產(chǎn)生明顯的保護性免疫［35-36］。由于明礬已經(jīng)批準(zhǔn)用于人類，將此改進為可注射疫苗可能是抗Hp 感染的一個可行途徑。,3. 2 呈遞系統(tǒng) 呈遞系統(tǒng)的主要作用是

27、保護抗原，使之免受胃腸道或其他部位的酶降解，從而增強機體對抗原的免疫應(yīng)答; 另外，呈遞系統(tǒng)還具有緩釋作用，能通過延長抗原的釋放時間來加強機體免疫應(yīng)答［37］。 常用的呈遞系統(tǒng)有微粒、脂質(zhì)體、凍干粉、復(fù)乳及凝膠、納米疫苗、減毒活菌、病毒體或病毒樣顆粒、殼聚糖及其衍生物等，但目前很少應(yīng)用于非人類靈長類動物或臨床試驗。減毒活疫苗載體是目前研究比較多的一種，其不僅能發(fā)揮佐劑效應(yīng)，還能作為呈遞系統(tǒng)呈遞抗原，具有良好的免疫及預(yù)防Hp

28、的作用，其中減毒沙門菌較常見，但活的減毒沙門菌在動物和人體內(nèi)仍有一定的毒性，這限制了它的使用。菌蛻作為一種較為新穎的藥物遞送系統(tǒng)，日益受到人們的關(guān)注。 目前Hp 疫苗的呈遞系統(tǒng)仍存在很多問題，如吸收率低、殘留溶劑毒性大、制造工藝復(fù)雜、難以長期保存等問題，仍需尋求高效、安全、易推廣的遞送物質(zhì)。,內(nèi)容簡介,內(nèi)容簡介,4 臨床應(yīng)用研究,Hp 疫苗在動物實驗中取得了令人滿意的結(jié)果，但在許多臨床試驗中卻面臨著許多問題，效果往往不盡

29、人意。目前臨床試驗中，主要是佐劑的不良反應(yīng)及抗原的免疫原性弱等問題。Malfertheiner 等［41］將含空泡毒素、細(xì)胞毒素相關(guān)基因A 蛋白、中性粒細(xì)胞激活蛋白的聯(lián)合疫苗加氫氧化鋁佐劑免疫57 例Hp 陰性志愿者，接種疫苗18 ～24 個月后檢測到記憶性抗體與細(xì)胞免疫反應(yīng)，且不良反應(yīng)輕微，提示氫氧化鋁在佐劑方面有較好的前景。然而，應(yīng)用這種疫苗于Ⅲ期臨床試驗中的結(jié)果卻不盡如人意，約50% 的志愿者接種該疫苗12 周后，Hp 檢測陰性，

30、與安慰劑組相比，其保護率相似［2］。國內(nèi)鄒全明教授等建立的“基因重組Hp 疫苗”已順利完成了世界第一個Hp 疫苗的Ⅲ期臨床研究，該疫苗是具有自主知識產(chǎn)權(quán)的一類新藥。,第 4 部分,總結(jié),,藥品進展：關(guān)于幽門螺桿菌疫苗的研究一直在進行，歷時15年后，在2009年獲國家一類新藥證書，2015年完成了三期臨床試驗，免疫效果可達70%以上。2016年公司披露因資金緊張和技術(shù)不足遇到瓶頸，遲遲不能通過國家食藥總局補充注冊申請，仍無法獲批。接種時

31、間：在第0、14和28天進行了口服疫苗接種接種方法：禁食至少2小時，并在口服疫苗2分鐘前，喝80毫升的緩沖溶液（含2.8克碳酸氫鈉和1.1g的檸檬酸鈉）。溶解在30毫升的25 - 30°C蒸餾水。,參考文獻,[1]劉文忠, 謝勇, 陸紅,等. 第五次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告[J]. 中國實用內(nèi)科雜志, 2017, 22(6). [2]周永君, 楊靖, 祝捷,等. 不同免疫方法對重組幽門螺桿菌多靶點疫苗的免疫效果研究[

32、C]// 中國臨床微生物學(xué)大會暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇. 2013. [3]鄒全明, 毛旭虎, 郭剛,等. 口服重組幽門螺桿菌疫苗Ⅰ、Ⅱ期臨床研究[C]// 中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編(上冊). 2007. [4]Zeng M, Mao X H, Li J X, et al. Efficacy, safety, and immunogenicity of an oral recombinant Helicobacter

33、 pylori vaccine in children in China: a randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial.[J]. Lancet, 2015, 386(10002):1457-1464. [5]黃桂柳, 黃贊松, 周喜漢. 幽門螺桿菌疫苗的研究進展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述, 2016, 22(5):866-870.,,謝謝,演示者 OfficePL