消毒滅菌方法

1、滅菌的方法基本上分為二大類：物理方法（干熱滅菌、濕熱滅菌、射線滅菌、濾過滅菌）和化學方法（氣體滅菌、藥液滅菌）。下面將分別介紹幾種常用的滅菌方法。　 滅菌涉及到廠房、設(shè)備、容器、潔具、工作服裝、原輔材料、成品、包裝材料、儀器等等的滅菌。無菌藥品特別是注射液、供角膜創(chuàng)傷或手術(shù)用滴眼劑等無菌制劑是直接進入人體血液循環(huán)系統(tǒng)而產(chǎn)生療效的藥品，所以對其質(zhì)量有特殊要求，它必須符合藥典無菌檢查的要求，為此，在生產(chǎn)過程中，要努力消除微生物的污染，殺滅

2、藥品中的微生物，這就是滅菌要達到的目的。,第一節(jié) 干熱滅菌法及其設(shè)備,1.  干熱滅菌 　 干熱可用于能耐受較高溫度，卻不宜被蒸汽穿透，或者易被濕熱破壞的物品的滅菌。同時干熱也是制藥工業(yè)中用于除熱原的方法之一。由于在相同的溫度下，干熱對微生物的殺滅效果遠低于飽和蒸汽，故干熱滅菌需要較高的溫度或較長的滅菌時間。評價干熱法滅菌的相對能力時，一般可采用相似于F0值的致死率單位和生物指示劑 2.  &

3、#160;干熱滅菌的主要設(shè)備 3.   干熱滅菌的主要設(shè)備有干熱滅菌柜、隧道滅菌系統(tǒng)。干熱滅菌設(shè)備一般由下列幾個重要部分組成： ·   加熱器―――它是干熱滅菌設(shè)備的主要組成部分，對滅菌效果的好壞影響極大。加熱器故障是造成干熱滅菌設(shè)備滅菌效果下降的主要原因之一，其主要表現(xiàn)為升溫速度下降；影響熱分布；產(chǎn)生塵埃物質(zhì)。而造成加熱器故障的原因，主要是加熱器的長期使用或通過加熱器的空

4、氣質(zhì)量較差所致。所以一般應在滅菌器的加熱系統(tǒng)配置電流監(jiān)測器，以及時發(fā)現(xiàn)其故障。,高效過濾器―――在干熱滅菌設(shè)備中，進風應通過高效過濾器；除去內(nèi)部空氣循環(huán)系統(tǒng)中產(chǎn)生的塵埃物質(zhì)需要高效過濾器；防止排風倒流的污染也可裝高效過濾器。所以高效過濾器必須滿足干熱滅菌工藝用風量的要求，并能承受相應的風壓。 ·   緩沖板、風閥、氣流調(diào)節(jié)器或空氣檔板―――緩沖板或空氣檔板用于控制干熱滅菌器的空氣流量，多安裝于進風或排風風

5、管或加熱器附近，用于正壓控制的氣流調(diào)節(jié)器可以安裝排風系統(tǒng)中的防止倒流風污染的高效過濾器附近，通過控制排風量控制正壓，也可以用氣流調(diào)節(jié)器控制進風和排風風量以保持正壓。一般情況下，干熱滅菌器腔室內(nèi)的壓力略高于其相臨的非無菌區(qū)而略低于其相臨的無菌區(qū)。 ·   風機―――對干熱滅菌器中的氣流循環(huán)影響很大，風機的風量應該可以測量，并可調(diào)整，必要時可以要求供應商將此項要求增加到其設(shè)備標準中，因為風機風量的測量指示值，

6、可以為設(shè)備使用過程中檢查風機狀態(tài)提供依據(jù)。,傳送帶（僅適用于連續(xù)法）―――傳送帶的速度，在連續(xù)傳送干熱滅菌系統(tǒng)中是十分重要的滅菌效果影響因素。目前大多數(shù)干熱連續(xù)法滅菌系統(tǒng)中已設(shè)有傳送帶速度控制器，但較少有速度記錄裝置。由于傳送帶速度決定了物料經(jīng)過滅菌器時所接受的熱量，所以其速度記錄是證明滅菌器在控制狀態(tài)下運行的基本資料之一，生產(chǎn)工藝中亦有必要保存每次滅菌過程的傳送速度的記錄。同時干熱滅菌器的SOP，也應明確規(guī)定各種滅菌過程傳送帶的運行速

7、度范圍，此運行速度范圍應是經(jīng)過驗證確定的。 ·   運行連鎖控制系統(tǒng)―――干熱滅菌器中連鎖控制系統(tǒng)設(shè)有：門連鎖控制系統(tǒng)；壓力傳感器；溫度傳感、控制、停止傳送帶運行的連鎖控制裝置等，以保證在任何情況下出現(xiàn)溫度低于設(shè)計要求時防止滅菌物品在低于滅菌溫度的情況下通過滅菌器。 ·   溫度控制器及記錄儀―――在干熱滅菌系統(tǒng)中，溫度探測、傳感、控制、記錄系統(tǒng)是整個滅菌過程控制的基礎(chǔ)，其

8、控制系統(tǒng)必須能保證滅菌器腔室內(nèi)滅菌溫度可以保持在設(shè)定的滅菌溫度范圍內(nèi)，其記錄系統(tǒng)必須將溫度探測、傳感系統(tǒng)的溫度讀數(shù)準確無誤地記錄清楚。,第二節(jié)  濕熱滅菌法及其設(shè)備,一、濕熱滅菌法 是在飽和蒸汽或沸水或流通蒸汽中進行滅菌的方法。由于蒸汽潛熱大，穿透力強，容易使蛋白質(zhì)變性或凝固，所以滅菌效率比干熱滅菌法高。這是注射劑生產(chǎn)中應用最廣泛的一種滅菌方法，它具有滅菌可靠，操作方便，易于控制和經(jīng)濟等優(yōu)點。 影響濕熱滅菌的因素有： 1

9、.     細菌的種類與數(shù)量：不同細菌，同一細菌的不同發(fā)育階段對熱的抵抗力有所不同。細菌數(shù)越少，滅菌時間越短。 2.     藥物性質(zhì)與滅菌時間：一般來說，滅菌溫度越高滅菌時間越短。但考慮到藥物的穩(wěn)定性，應在達到有效滅菌的前題下可適當降低滅菌溫度或縮短滅菌時間。 3.     蒸汽的性質(zhì)：蒸汽有

10、飽和蒸汽，濕飽和蒸汽和過熱蒸汽。飽和蒸汽熱含量較高，熱穿透力較大，因此滅菌效力高。濕飽和蒸汽帶有水分，熱含量較低，穿透力差，滅菌效力較低。過熱蒸汽溫度高于飽和蒸汽，但穿透力差，滅菌效率低。 4.      介質(zhì)的性質(zhì)：制劑中含有營養(yǎng)物質(zhì)，如糖類、蛋白質(zhì)等，增強細菌的抗熱性。細菌的生存能力也受介質(zhì)PH值的影響。一般中性環(huán)境耐熱性最大，堿性次之，酸性不利于細菌發(fā)育。,濕熱滅菌法的

11、主要設(shè)備,濕熱滅菌法的主要設(shè)備是滅菌釜，滅菌釜種類很多，性能差異也很大，但其基本結(jié)構(gòu)大同小異，所用的材質(zhì)為堅固的合金?，F(xiàn)在國內(nèi)很多企業(yè)使用的方型高壓滅菌釜，能密閉耐壓，有排氣口、安全閥、壓力和溫度指示裝置。帶有夾套的滅菌柜備有帶軌道的格車，分為若干格。滅菌柜頂部裝有壓力表二只，一只指示蒸汽夾套內(nèi)的壓力，另一只指示柜室內(nèi)的壓力，兩壓力表中間為溫度計。滅菌柜的上方還應安裝排氣閥，以便開始通入加熱蒸汽時排除不凝性氣體。近年來，一些制藥企業(yè)已經(jīng)

12、開始采用具有抽真空能力及F0控制的蒸汽滅菌釜，目前國內(nèi)使用的進口滅菌釜主要有二種：一種以蒸汽為滅菌介質(zhì)的旋轉(zhuǎn)式滅菌釜，如奧地利的HDRR009．20／IS，另一種以過熱水作介質(zhì)的噴淋式滅菌釜，如意大利FEDEGARI公司的FOW5－500。進口滅菌釜的主要優(yōu)點是批次量較大，溫度控制系統(tǒng)準確度及精密較好，產(chǎn)品滅菌過程中受熱比較均勻。,,國產(chǎn)快速冷卻滅菌釜工作原理如下：,,滅菌釜的基本滅菌程序為：,第三節(jié) 其他滅菌方法及消毒方法,一、輻射滅

13、菌法 以放射性同位素，（60CO或137CS）放射的g 射線殺菌的方法。射線可使有機化合物的分子直接發(fā)生電離，產(chǎn)生破壞正常代射的自由基，導致微生物體內(nèi)的大分子化合物分解。輻射滅菌的特點是不升高滅產(chǎn)品的溫度，穿透性強，適合于不耐熱藥物的滅菌，醫(yī)療器械、高分子材料、包裝材料等的滅菌。滅菌劑量一般用2.5×104GY（弋瑞）。此法已為《英國藥典》（1998），《日本藥局方》十三版所收載。我國有些企業(yè)亦用60CO對某些中藥和醫(yī)療器械

14、進行滅菌。輻射滅菌，設(shè)備費用高，對某此藥品可能產(chǎn)生藥效降低，產(chǎn)生毒性物質(zhì)或發(fā)熱物質(zhì)，使用輻射滅菌還應注意安全防護措施。,二、紫外線滅菌法,是指用紫外線照射殺滅微生物方法。一般用于滅菌的紫外線波長是200~ 300nm，滅菌力最強的波長是253.7nm。紫外線作用于核酸蛋白促使其變性，同時空氣受紫外線照射后產(chǎn)生微量臭氧，從而起共同殺菌作用。紫外線進行直線傳播，可被不同的表面反射，穿透力微弱，但較易穿透清潔空氣及純凈的水。因此本法適用于照射

15、物體表面之滅菌、無菌室的空氣及水的滅菌；不適用于藥液的滅菌、固體物質(zhì)深部的滅菌；普通玻璃可吸收紫外線，因此裝于玻璃容器中的藥物不能用此法滅菌。紫外線對人體照射過久，會發(fā)生結(jié)膜炎，紅斑及皮膚燒灼等現(xiàn)象，故一般在人入室前開啟紫外線燈1~ 2小時，關(guān)閉后人才進入潔凈室，如果必須在人進去后仍要開紫外線滅菌，則人的皮膚及眼睛應有有效的防護措施。用紫外線照射滅時要注意下列問題： 1．紫外線的殺菌力，隨使用時間增加而減退，一般使用時間達到額定時間

16、70％時應更換紫外線燈管，以保證殺菌效果。國產(chǎn)紫外線燈平均壽命一般為2000h。2．紫外線的殺菌作用隨菌種不同而不同，殺霉菌的照射量要比殺桿菌大40~ 50倍。3．紫外線照射通常按相對濕度為60％的基礎(chǔ)設(shè)計，室內(nèi)濕度增加時，照射量應相應增加。4．紫外線滅菌效果與照射的時間長短有關(guān)，這需要通過驗證來確定照射時間。紫外照射燈的安裝形式及高度，應根據(jù)實際情況，參考使用說明決定。,三、環(huán)氧乙烷滅菌法,環(huán)氧乙烷滅菌法是利用環(huán)氧乙烷氣體進行

17、殺菌的方法。它是一種傳統(tǒng)的滅菌方法，可應用于工衣滅菌、不耐加熱滅菌的藥品、醫(yī)用器具、設(shè)施、設(shè)備等滅菌。環(huán)氧乙烷滅菌系統(tǒng)，主要有下列四項互相制約的重要因素影響滅菌效果： 1.            濕度； 2.          

18、;  溫度； 3.            氣體濃度； 4.            滅菌時間。因為環(huán)氧乙烷是易燃易爆物質(zhì)，明火可以引起燃燒，同時由于氣體分解不可能引起爆炸，環(huán)氧乙烷滅菌中應十分注意安全問題。

19、環(huán)氧乙烷具有非常強的滲透和擴散能力，其滅菌的機理主要是強氧化，因此具有殺菌譜廣，滅菌能力強的特點，對微生物的繁殖體、芽孢有較強的殺滅效果。雖然環(huán)氧乙烷在高濃度時有刺激性臭味和毒性，但屬中度毒性，一般可以很快揮發(fā)，不會在系統(tǒng)內(nèi)表面殘留余毒。用環(huán)氧乙烷氣體滅菌的程序,大致為將滅菌物品置于滅菌器內(nèi)，減壓排除空氣，預熱，環(huán)氧乙烷氣體采用混合氣（一般環(huán)氧乙烷氣體含10~ 20％，二氧化碳含80~ 90％），在減壓下輸入混合氣體，保持一定濃度、

20、溫度和濕度，經(jīng)過一定時間后，抽真空排除環(huán)氧乙烷氣體，然后送入無菌空氣置換環(huán)氧乙烷氣體，直至排凈。,四、過濾滅菌法,過濾滅菌法是用濾過方法除去活的或死的微生物的方法，是一種機械除菌方法，這種機械叫除菌過濾器。主要用于對熱不穩(wěn)定的藥物溶液、氣體、水的滅菌。供滅菌用的濾器，要求能有效地從溶液中除凈微生物，溶液順暢地由濾器通過，濾液中不落入任何不需要的物質(zhì)，濾器容易清洗，操作簡便。 繁殖型細菌很少小于1m m的，芽胞

21、大小為0.5m m或更小些。所以，對于以過篩作用濾過的濾器，例如纖維素酯膜濾器，其孔徑大小必須小到足以阻止細菌和芽孢進入濾孔之內(nèi)，孔徑約為0.2m m?？孔枇粲诳椎纼?nèi)或靜電作用的濾器，孔徑可稍大于所要濾除的顆粒，但壓力過大或波動，顆粒就有被擠過的可能。最常用測定孔徑的方法，是用大小為0.7m m左右的靈菌（B．prodigilsus）混懸液濾過，濾液通過培養(yǎng)實驗，觀察有無靈菌生長。常用除菌濾器有微孔薄膜器，摺疊式纖維素濾棒，一般選用孔徑

22、0.22m m。濾過法應配合無菌操作技術(shù)，并必須對成品進行無菌檢查，以保證其除菌質(zhì)量。,五、臭氧消毒法,臭氧（O3）的消毒原理是：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧（O2）和單個氧原子（O），后者具有很強的活性，對細菌有極強的氧化作用,臭氧氧化分解了細菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細胞膜，將它殺死。多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普遍氧分子（O2），不存在任何有毒殘留物，故稱為無污染消毒劑。它不但對各種細菌（包括

23、肝炎病毒、大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等）有極強的殺來滅能力，而且對霉菌也很有效。生產(chǎn)臭氧的原料主要是電能和空氣，一般通過高頻臭氧發(fā)生器（電子消毒器）來獲得，消毒時,直接將臭氧發(fā)生器直于房間中間即可。臭氧消毒效果的驗證中需確誶和校正的臭氧發(fā)生器技術(shù)指標有：臭氧產(chǎn)量、臭氧濃度和時間定時器，并通過驗證檢查細菌數(shù)來確定消毒時間。,六、甲醛消毒方法,·   計算房間體積，按10g/m3的比例秤出甲醛。 ·

24、;   將甲醛倒甲醛發(fā)生器或加熱盤或燒杯中，并放好加濕用水，必要時還可加入高錳酸鉀（2-3g/m3 ）,然后加熱（甲醛發(fā)生器用蒸汽加熱，加熱盤或燒杯可用熱水盛入其中加熱）使其蒸發(fā)成氣體。 ·   滅菌流程：空調(diào)器停止運轉(zhuǎn)→啟動甲醛氣體發(fā)生器或在加熱盤中熱甲醛→讓甲醛氣體擴散約30分鐘→啟動空調(diào)器讓甲醛氣體循環(huán)約30分鐘→ 停止空調(diào)器，房間熏蒸消毒，時間不少于8小時→房間排氣，用新鮮空氣

25、置換約2小時→恢復正常運行。 當相對溫度在65％以上，溫度在24－40℃時，甲醛氣體的消毒效果最好。 ·   甲醛消毒滅菌的氣體發(fā)生量、熏蒸時間，換氣時間等應以驗證結(jié)果來最后確定。,第四節(jié) 消毒劑消毒,潔凈室的墻面、天花板、門窗、機器設(shè)備、儀器、操作臺、車、桌、椅等表面以及人體雙手（手套）在環(huán)境驗證及日常生產(chǎn)時，應定期清潔并用消毒劑噴灑。常見的消毒劑有異丙醇（75％）、乙醇（75％）、新潔而滅（0.1

26、~ 0.2％）等。亦可用0.5~ 3%石碳酸或2~ 5％的甲苯酚。無菌室用的消毒劑必須在層流工作臺中，用0.22μm的濾膜過濾后方能使用。六、滅菌管理要點 一)、選用濾過器材和處理方法應符合工藝要求，微孔濾膜使用前后應作完整性試驗，以保證其滅菌效果。 二)、藥液從配制到滅菌開始，其間隔不得超過工藝規(guī)定的時間。 三)、滅菌應有溫度、壓力及升溫時間、恒溫時間、數(shù)量及全過程的溫度壓力曲線圖或溫度曲線圖。 四)、按批號進行滅菌，不得

27、混批。滅菌前后的中間產(chǎn)品應有可靠的防混措施。 五)、滅菌設(shè)備使用前都必須進行驗證，工藝改變或大修后，要進行再驗證，以確保滅菌效果。 六)、滅菌釜宜選擇雙扉式的滅菌釜，使用前應進行溫度均勻性和滅菌效果的驗證，并有記錄，F(xiàn)0值應控制在8.0以上。 七)、直接接觸藥品的包裝材料、設(shè)備和其他物品的從滅菌到使用時間間隔應有規(guī)定。 1.當一個批號產(chǎn)品使用多個滅菌柜滅菌時，應加亞批號。 2.使用消毒劑消毒時，應有二個以上消毒劑輪換使用，以防

28、止產(chǎn)生耐藥菌株。,精品課件！,精品課件！,第五節(jié) 蒸汽滅菌釜驗證,蒸汽滅菌驗證，一般的驗證步驟如下： 1.            驗證方案的制訂； 2.            驗證方案的批準； 3. &#

29、160;          儀表及文件的準備； 4.            預確認； 5.            安裝確認――

30、―電氣安裝、蒸汽安裝、冷卻水安裝； 6.            運行確認―――單機或系統(tǒng)試車； 7.            性能確認―――熱分布測試、熱穿透性試驗、生物指示劑驗證試驗、微生物孢子的挑戰(zhàn)性試驗； 8.

31、            驗證報告―――數(shù)據(jù)分析、驗證結(jié)果、評價和建議； 9.            批準結(jié)論。蒸汽滅菌釜驗證如何進行，原國家醫(yī)藥管理局推行GMP、GSP委員會編的《藥品生產(chǎn)驗證指南》（1996年4月出