大腸桿菌中CRISPR-Cas系統(tǒng)捕獲間區(qū)序列作用機理的相關(guān)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、CRISPR-Cas系統(tǒng)是一類獨特的獲得性免疫機制，能使宿主抵御病毒、質(zhì)粒等外來DNA的入侵，廣泛存在于大多數(shù)的細菌和幾乎所有的古細菌中。其作用機理分為三個階段:首先是間區(qū)捕獲階段，宿主中保守的Cas1/2蛋白復合體特異性識別并捕獲外源基因（病毒、質(zhì)粒等）中含有原間區(qū)序列鄰近基序的原間區(qū)序列到CRISPR序列中緊靠引導序列區(qū)的第一個重復序列的下游;其次是pre-crRNA成熟階段，CRISPR從引導區(qū)轉(zhuǎn)錄成一段pre-crRNA序列，并

2、被相關(guān)Cas蛋白復合體切割為成熟的crRNA，crRNA包含一段保守的重復序列和一個間區(qū)序列;最后，crRNA與Cas蛋白結(jié)合成為效應復合體通過互補配對識別入侵的核酸序列，誘導序列特異性的切割，從而阻止外源遺傳物質(zhì)的增殖擴散。近幾年來，CRISPR-Cas系統(tǒng)的作用機理和應用方面得到突破性的進展。
　　盡管如此，間區(qū)序列的捕獲階段仍存在很多疑問。為了找到答案，本文設計了如下方案，首先在大腸桿菌BL21AI菌株構(gòu)建了一個高效的間區(qū)序

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