基于PGMA為骨架基因載體的構(gòu)建及其性能研究.pdf

1、臨床上所要求的成功基因載體不僅要有高的轉(zhuǎn)染效率還要具有低的毒性。本課題主要以PGMA為骨架構(gòu)建低毒高效的基因載體。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下:
　　 1，利用乙醇胺(EA)與線性聚甲基丙烯酸縮水甘油酯(PGMA)進(jìn)行開(kāi)環(huán)反應(yīng)，得到具有仲胺和非離子親水性基團(tuán)的陽(yáng)離子聚合物PGEA。通過(guò)一系列的轉(zhuǎn)染和毒性試驗(yàn)表明，PGEA在不同的細(xì)胞系中都表現(xiàn)出很高的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率(高于25KD的聚乙烯亞胺(PEI)或與之相當(dāng)）以及很低的細(xì)胞毒性（小于25KD

2、PEI的10％）。
　　 2，利用不同的胺類(lèi)化合物對(duì)PGMA進(jìn)行功能化(包括1-氨基-2-丙醇(APl)功能化的PGAP1;3-氨基-2-丙醇(AP2)功能化的PGAP2;乙醇胺(EA)功能化的PGEA;乙醇胺/N，N-二甲基乙二胺(EA/DED)共同功能化的PGEADED;DED功能化的PGDED:季胺化的DED(QDED)功能化的QPGDED，比較它們作為基因載體的性能。與EA相比，AP1含有一個(gè)多余的甲基，而AP2含有一個(gè)

3、多余的亞甲基，這使它們具有大致相同的縮合DNA能力，并能提高轉(zhuǎn)染效率，從結(jié)果上看，PGAP1的轉(zhuǎn)染效率是所有材料中最高的。DED含有叔胺基團(tuán)，可以被進(jìn)一步季胺化以增加表面正電荷，進(jìn)而增強(qiáng)縮合DNA的能力，與PGDED相比，QPGDED的毒性沒(méi)有明顯增加，但DED以及季胺化的QDED會(huì)嚴(yán)重影響材料的緩沖能力，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。本研究的主要目的是更好的構(gòu)建PGMA系列的基因載體，使其具有優(yōu)異的生物及物理性能。
　　 3，進(jìn)一步提高P

4、GMA衍生物載體的可降解性和轉(zhuǎn)染效率將有利于構(gòu)建更好的基因傳遞體系。梳型陽(yáng)離子聚合物作為非病毒基因載體已經(jīng)受到關(guān)注和重視。我們利用ATRP和開(kāi)環(huán)反應(yīng)制備了具有可降解性的具有高分子量梳狀的PGMA衍生物即(c-PGEA)載體。通過(guò)一系列的表征，結(jié)果證明梳狀c-PGEA載體具有良好的絡(luò)合DNA的能力、低細(xì)胞毒性和良好的緩沖能力。更重要的是，c-PGEA載體能提高基因的轉(zhuǎn)染效率，并且它們具有降解性有利于PGEA最終從人體中排除。此外，c-PG