基于PGMA為骨架基因載體的構建及其性能研究.pdf

1、臨床上所要求的成功基因載體不僅要有高的轉(zhuǎn)染效率還要具有低的毒性。本課題主要以PGMA為骨架構建低毒高效的基因載體。具體實驗內(nèi)容如下:
　　 1，利用乙醇胺(EA)與線性聚甲基丙烯酸縮水甘油酯(PGMA)進行開環(huán)反應，得到具有仲胺和非離子親水性基團的陽離子聚合物PGEA。通過一系列的轉(zhuǎn)染和毒性試驗表明，PGEA在不同的細胞系中都表現(xiàn)出很高的細胞轉(zhuǎn)染效率(高于25KD的聚乙烯亞胺(PEI)或與之相當）以及很低的細胞毒性（小于25KD

2、PEI的10％）。
　　 2，利用不同的胺類化合物對PGMA進行功能化(包括1-氨基-2-丙醇(APl)功能化的PGAP1;3-氨基-2-丙醇(AP2)功能化的PGAP2;乙醇胺(EA)功能化的PGEA;乙醇胺/N，N-二甲基乙二胺(EA/DED)共同功能化的PGEADED;DED功能化的PGDED:季胺化的DED(QDED)功能化的QPGDED，比較它們作為基因載體的性能。與EA相比，AP1含有一個多余的甲基，而AP2含有一個

3、多余的亞甲基，這使它們具有大致相同的縮合DNA能力，并能提高轉(zhuǎn)染效率，從結(jié)果上看，PGAP1的轉(zhuǎn)染效率是所有材料中最高的。DED含有叔胺基團，可以被進一步季胺化以增加表面正電荷，進而增強縮合DNA的能力，與PGDED相比，QPGDED的毒性沒有明顯增加，但DED以及季胺化的QDED會嚴重影響材料的緩沖能力，導致轉(zhuǎn)染效率降低。本研究的主要目的是更好的構建PGMA系列的基因載體，使其具有優(yōu)異的生物及物理性能。
　　 3，進一步提高P

4、GMA衍生物載體的可降解性和轉(zhuǎn)染效率將有利于構建更好的基因傳遞體系。梳型陽離子聚合物作為非病毒基因載體已經(jīng)受到關注和重視。我們利用ATRP和開環(huán)反應制備了具有可降解性的具有高分子量梳狀的PGMA衍生物即(c-PGEA)載體。通過一系列的表征，結(jié)果證明梳狀c-PGEA載體具有良好的絡合DNA的能力、低細胞毒性和良好的緩沖能力。更重要的是，c-PGEA載體能提高基因的轉(zhuǎn)染效率，并且它們具有降解性有利于PGEA最終從人體中排除。此外，c-PG