產(chǎn)KPC型碳青霉烯酶大腸埃希菌分子流行病學(xué)及耐藥傳播機(jī)制研究.pdf

1、碳青霉烯類抗生素是臨床治療多重耐藥革蘭陰性菌感染的重要藥物，碳青霉烯耐藥腸桿菌科細(xì)菌的流行給臨床感染性疾病的治療帶來了很大難題，而耐藥的主要原因即是細(xì)菌產(chǎn)碳青霉烯酶，其中在我國以KPC型碳青霉烯酶最為常見。
　　本研究收集2012年7月至2014年1月杭州市中醫(yī)院和浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院臨床共25株產(chǎn)KPC酶大腸埃希菌。利用K-B紙片法測試所有菌株對22種常用抗菌藥物的敏感性;改良Hodge實驗確認(rèn)菌株產(chǎn)碳青霉烯酶，PCR擴(kuò)增

2、確認(rèn)blaKPC基因;脈沖場凝膠電泳(PFGE)及多位點序列分型(MLST)技術(shù)進(jìn)行菌株同源性分析。利用濾膜接合實驗將臨床菌株攜帶質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移至受體菌;堿裂解法提取質(zhì)粒;細(xì)菌包埋S1核酸酶酶切再PFGE的方法判斷質(zhì)粒分子量大小;挑選代表菌株進(jìn)行高通量測序及序列分析，注釋攜帶有blaKPC基因的片段，并設(shè)計引物PCR擴(kuò)增其余菌株，分析blaKPC基因的周圍結(jié)構(gòu);PCR擴(kuò)增篩查其它常見的耐藥基因。
　　25株臨床收集大腸埃希菌經(jīng)確認(rèn)均

3、為產(chǎn)KPC酶菌株，編碼有blaKPC-2基因，這些產(chǎn)KPC酶菌株對大多常用抗菌藥物的耐藥率很高，均表現(xiàn)為多重耐藥菌。流行病學(xué)分析顯示，產(chǎn)KPC酶菌株來源病人以中老年為主，送檢的臨床科室分布有一定的集中性，多集中在急診科、ICU和老年病科。PFGE分型可以將25株菌株分為克隆A（4株）、克隆B（5株）和克隆C（2株），其余14株為散發(fā)克隆。MLST分型則分為8個ST型，其中以ST131型為主，共有14株，另外還包括ST167型3株，ST2

4、003型3株，其余ST型各有1株，這些ST型之間同源性相距較遠(yuǎn)。臨床分離大腸埃希菌往往攜帶多個質(zhì)粒，質(zhì)粒分子量大小在25kb～200kb之間，而且大多具有可接合性。blaKPC-2基因由質(zhì)粒編碼，高通量測序所獲得的序列片段分析表明blaKPC-2基因位于一個Tn3-Tn4401復(fù)合轉(zhuǎn)座子中，并且大部分菌株都擁有一致的周圍結(jié)構(gòu)。這些菌株還常共同編碼blaCTX-M、 blaTEM、 blaSHV、 qnr、aac(6')-Ib及rmtB等