版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、基于PCR的體外誘變法發(fā)展至今，使用的引物從重組PCR法(Recombination PCR)的至少4條引物到大引物PCR法(Megaprimer PCR)的3條引物，再到Quikchange快速突變法(QuikChange Mutagenesis PCR)的2條引物。從至少3輪PCR反應(yīng)發(fā)展到只需2輪，到Quikchange法及反向PCR法(Inverse PCR)的僅使用一輪PCR反應(yīng)，步驟越來越簡單，操作越來越簡便，為使用PCR技
2、術(shù)進行各種基因克隆操作的科學工作者節(jié)省了大量的時間和精力。 近幾年，有文獻報道使用基于Quikchange原理的方法來制作DNA片段的插入、替代以及刪除突變，但由于QCM-PCR的低產(chǎn)量，難以產(chǎn)生陽性克隆。而采用末端相對的(tail-to-tail)引物設(shè)計方法的反向PCR則需要用連接酶連接PCR擴增產(chǎn)物，操作麻煩且陽性率也偏低。 我們實驗室一直在尋找一種簡單高效的可以用于基因的刪除、插入及替代突變的方法，通過大量研究和
3、實驗發(fā)現(xiàn)，可以使用一種基于反向PCR原理，使用全新的引物設(shè)計的突變方法--“COP”突變法，該方法采用與QuikChange點突變法相同的操作步驟，其策略是設(shè)計一對中心重合(Central overlap)的引物，長引物的5’端序列和3’端序列的Tm值均不低于66℃，短引物Tm值約為長引物一半，且與長引物中心重合互補。這種方法能用于超過20bp的堿基的插入或替代突變，及用于超過2000bp DNA片段的刪除突變的研究。 這種方法
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
評論
0/150
提交評論