RB-P53調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在乳腺癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的：應(yīng)用羥基脲（HU）和阿霉素（ADM）誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞系DNA損傷，探討RB和P53在乳腺癌DNA損傷以及上皮間質(zhì)性轉(zhuǎn)化（EMT）中的作用，從而探索RB-P53調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在乳腺癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：使用HU和ADM兩種藥物分別誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7、SKBR3、MDA-MB468）DNA損傷，應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)RB和P53的表達(dá)情況，分別應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)和MTT技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖活力

2、；然后采用轉(zhuǎn)染技術(shù)敲低MCF-7細(xì)胞系RB的表達(dá)，檢測(cè)HU和ADM作用前后RB和P53的表達(dá)情況以及細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖活力；最后分別抑制MCF-7（表達(dá)野生型P53wt）、MCF-10A（表達(dá)野生型P53wt）和SKBR3（表達(dá)突變型P53mt）細(xì)胞系中RB/P53的表達(dá)，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測(cè)RB、P53和EMT相關(guān)標(biāo)志蛋白（如E-cadherin和snail）的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：HU作用于三

3、種乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7、SKBR3和MDA-MB-468）均誘導(dǎo)了G1/S期阻滯，HU作用于MCF-7使P53wt和RB表達(dá)上調(diào)，HU作用于MDA-MB-468后P53mt表達(dá)變化不顯著，HU作用于SKBR3后P53mt表達(dá)下調(diào)而RB表達(dá)上調(diào)，說明突變型P53失去了監(jiān)控細(xì)胞周期的功能；HU洗脫后，MCF-7和SKBR3細(xì)胞周期阻滯狀態(tài)較HU洗脫前變化不顯著，而MDA-MB-468由HU洗脫前的G1/S期阻滯轉(zhuǎn)變?yōu)镠U洗脫后的G2/M

4、期阻滯。HU和ADM均可以抑制MCF-7細(xì)胞系增殖，并且敲低RB可以降低其抑制細(xì)胞增殖的作用；敲低RB可使三個(gè)細(xì)胞系（MCF-7、MCF10A和SKBR3）的P53表達(dá)水平均降低，也可以促使HU誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞周期阻滯狀態(tài)由G1/S期阻滯轉(zhuǎn)變?yōu)镚2/M期阻滯以及ADM誘導(dǎo)的G2/M期阻滯更加明顯。在MCF-7細(xì)胞中，敲低RB或P53均可下調(diào)E-cadherin表達(dá)和上調(diào)snail表達(dá)，RB和P53雙敲低可引起E-cadherin表達(dá)

5、水平的進(jìn)一步降低和snail表達(dá)水平的進(jìn)一步升高，在正常乳腺上皮細(xì)胞MCF10A中，結(jié)果與MCF-7類似，而SKBR3細(xì)胞E-cadherin表達(dá)缺失，P53為突變型，敲低RB可引起snail表達(dá)水平明顯升高。
　　結(jié)論：在乳腺癌細(xì)胞系中，RB和P53wt都參與調(diào)控HU和ADM誘導(dǎo)的DNA損傷，且彼此相互依賴，此外，RB還參與調(diào)控G2/M期，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究；當(dāng)RB表達(dá)水平下降時(shí)，P53wt表達(dá)水平隨之下調(diào)，乳腺癌細(xì)胞系發(fā)生