骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞研究.pdf

1、骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)是最常見的關(guān)節(jié)疾病之一，它的顯著病理特征是進(jìn)展性的關(guān)節(jié)軟骨破壞，從而導(dǎo)致關(guān)節(jié)疼痛和活動(dòng)受限，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是來源于間質(zhì)組織，具有增值和多向分化能力的細(xì)胞，廣泛參與體內(nèi)損傷修復(fù)過程。既往有研究發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)液中含有間充質(zhì)干細(xì)胞，而且早期骨關(guān)節(jié)炎比正常人的關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量會(huì)有所增加。這一發(fā)現(xiàn)對(duì)于研究骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制

2、及治療方法有著重要的意義，但是這些研究也存在一定的局限性，例如他們使用的檢測(cè)方法還不夠敏感和精確。
　　目的：我們希望通過本研究來分離培養(yǎng)和鑒定人關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞，基于Flowsight(R)圖像流式細(xì)胞技術(shù)，比較早期和晚期骨關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞比例的差異。
　　方法:(1)取人關(guān)節(jié)液后，采用貼壁法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，鏡下觀察關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)。5％ CO2、37℃恒溫箱中培養(yǎng)28天，至細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶底后，使用PE-

3、CD44、FITC-CD90、APC-CD73、PerCP-Cy5.5-CD105、eFluor450-CD34、APC-eFluor780-CD45這6種熒光抗體標(biāo)記細(xì)胞，應(yīng)用FlowSight(R)流式細(xì)胞儀鑒定關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞，并觀察其單細(xì)胞形態(tài)和熒光染色情況。(2)根據(jù)患者術(shù)前下肢全長和膝關(guān)節(jié)側(cè)位X線片，依據(jù)骨關(guān)節(jié)炎的Kellgren與Lawrence(K-L)影像學(xué)分期方法，將患者分為早期OA組（17例）和晚期OA組(26例

4、)。取患者的關(guān)節(jié)液后，一半關(guān)節(jié)液不經(jīng)過培養(yǎng)，直接使用圖像流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞的比例;另一半關(guān)節(jié)液進(jìn)行分離培養(yǎng)，28天后檢測(cè)關(guān)節(jié)液中間充質(zhì)干細(xì)胞的比例，評(píng)估關(guān)節(jié)液間充質(zhì)干細(xì)胞比例與膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎影像學(xué)分期及其他因素的相關(guān)性。
　　結(jié)果:關(guān)節(jié)液中的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后，顯微鏡下可見細(xì)胞呈紡錘形，有集落形成，符合間充質(zhì)干細(xì)胞的外觀特征。圖像流式細(xì)胞儀中可見分離出的間充質(zhì)干細(xì)胞的單細(xì)胞圖像和熒光染色照片，關(guān)節(jié)液間充質(zhì)千細(xì)胞在表面標(biāo)志物中

5、表達(dá)CD44、CD90、CD73、CD105，不表達(dá)CD34和CD45。新鮮的關(guān)節(jié)液中，晚期OA組SF- MSCs占總細(xì)胞的比例高于早期OA組(2.05％±0.64 vs3.18％±0.92，P＜0.01)。細(xì)胞培養(yǎng)后，兩組SF-MSCs的比例仍有差異(47.15％±14.36 vs57.64％±10.84，P＜0.01)。SF-MSC比例與年齡、BMI、HSS評(píng)分等因素?zé)o相關(guān)性。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了關(guān)節(jié)液中存在間充質(zhì)干細(xì)胞，