慢性不可預(yù)見溫和應(yīng)激致抑郁通過糖皮質(zhì)激素受體及腎上腺素能通路擾動藥物代謝及機制研究.pdf

1、目的:
　　本實驗室既往研究發(fā)現(xiàn)慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激(Chronic Unexpected Mild Stress，CUMS)致抑郁擾動大鼠體內(nèi)藥物代謝過程，但機制未明。本課題將研究CUMS致抑郁大鼠瑞格列奈體內(nèi)過程，對肝臟進行基因表達譜研究和驗證，檢測血清和尿液代謝譜，在細胞水平探索調(diào)控藥物代謝酶表達的信號通路。
　　方法:
　　1.建立CUMS致抑郁模型:將SD大鼠抑郁組孤養(yǎng)，予8種不可預(yù)見性應(yīng)激造模8周。造模前

2、后，進行曠場試驗評分、糖水偏好實驗，測定血漿皮質(zhì)醇及腎上腺素濃度，共同測定抑郁建模是否成功。
　　2.藥代動力學(xué)及藥物代謝酶表達的檢測:造模成功后，用LC-MS/MS測定SD大鼠瑞格列奈血漿濃度，用qRT-PCR檢測SD大鼠肝臟Cyp2c11等藥物代謝酶的表達。
　　3.GK大鼠肝臟mRNA表達及驗證:GK大鼠發(fā)病后建立抑郁模型，用基因表達譜芯片檢測大鼠肝臟mRNA表達水平，并進行生物信息學(xué)分析。qRT-PCR及Wester

3、n blot驗證所關(guān)注的差異基因表達水平。
　　4.GK大鼠血清和尿液代謝譜研究:LC-Q/TOF-MS檢測GK大鼠血清及尿液中代謝產(chǎn)物，Simca-P軟件進行多元統(tǒng)計分析，尋找差異代謝產(chǎn)物及KEGG代謝通路。
　　5.信號通路對BRL3A的影響:CCK8挑選無毒性藥物濃度，單用地塞米松(Dexamethasone，DEX)、右美托咪定(Dexmedetomidine，DEXT)、異丙腎上腺素(Isoprenaline，IS

4、O)、去氧腎上腺素(Phenylephrine，PE)，或DEX分別聯(lián)用8-Br-cAMP、RU486，干預(yù)BRL3A48hr，qRT-PCR及Western blot檢測藥物代謝酶的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.SD大鼠經(jīng)過8周造模后，抑郁組水平運動能力、垂直探索能力較對照組顯著降低，糖水偏好減少，血漿皮質(zhì)醇及腎上腺素濃度較對照組升高，說明建模成功。
　　2.抑郁模型組與對照組相比，瑞格列奈血漿藥物的半衰期(T1/

5、2)、達峰時間(Tmax)、峰濃度(Cmax)、曲線下面積(AUC0-∞)、平均停留時間(MRT0-∞)均降低。抑郁組肝臟Cyp2c11表達上調(diào)，Cyp2c13、Cyp2c8/9表達無差異。
　　3.抑郁組GK大鼠肝臟差異表達基因共49個。表達上調(diào)基因以Nr1i3為中心節(jié)點，調(diào)控其他基因的表達。表達上調(diào)基因在藥物代謝、類固醇激素合成等KEGG通路富集。qRT-PCR驗證所關(guān)注的基因，如Nr1i3、Cyp2b1/2、Ugt1a1、U

6、gt2b1、Cyp17a1、Cyp3a18等表達上調(diào)，CAR、Ugt1a1蛋白表達也顯著上調(diào)。
　　4.抑郁組GK大鼠血清及尿液代謝譜分別有16、28種代謝物顯著改變，在22及17個KEGG代謝通路富集，其中也包括藥物代謝、糖皮質(zhì)激素信號通路。
　　5.1umol/L DEX及8-Br-cAMP可顯著促進BRL3A Ugt1a1及Nr1i2表達上調(diào)，PXR表達也顯著上調(diào)，RU486可逆轉(zhuǎn)這種上調(diào)效應(yīng)。DEXT及PE可輕度上調(diào)