蚯蚓纖溶酶Efp-0和Efp-Ⅱ基因的克隆與表達(dá).pdf

1、蚯蚓纖溶酶（earthworm fibrinolytic enzymes，EFE）是一類(lèi)在蚯蚓體內(nèi)分離到的具有纖溶蛋白作用和激活纖溶酶原作用的蛋白質(zhì)，具有抗凝、纖溶和溶栓作用，可以作為溶栓藥物治療因血栓引起的各種疾病。在其分子生物學(xué)研究方面，國(guó)內(nèi)外學(xué)者分別在GenBank中遞交了24條核酸序列和31條蛋白質(zhì)序列（24條通過(guò)核酸序列翻譯所得，7條是直接報(bào)道的部分蛋白質(zhì)序列）。根據(jù)N-末端氨基酸序列比對(duì)，這些序列與Mihara H報(bào)道的4組

2、EFE（F-Ⅰ-0、F-Ⅰ、F-Ⅱ、F-Ⅲ）中的3組一致或相似性極高，但與F-Ⅰ-0組分序列一致的核酸序列此時(shí)尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本實(shí)驗(yàn)前期已經(jīng)利用DNAMAN軟件，從正蚓科（Lumbricidae）的dbEST中獲得該組分的核酸序列信息，電子克隆得到一個(gè)EfP-0的序列，根據(jù)該序列設(shè)計(jì)特異引物，經(jīng)過(guò)RT-PCR反應(yīng)成功地從赤子愛(ài)勝蚓（Eisenia foetida）中克隆到一條蚯蚓纖溶酶新基因，命名為Efp-0。Efp-0基因

3、全長(zhǎng)678bp，編碼225個(gè)氨基酸的成熟肽，屬絲氨酸蛋白酶，胰蛋白酶家族，與F-Ⅰ-0組分的氨基酸組成非常接近。BLAST證明Efp-0與已報(bào)道的蚯蚓纖溶酶基因之間的相似性均低于40％，因此為蚯蚓纖溶酶中的一個(gè)新基因，Genbank登錄號(hào)為DQ836917。構(gòu)建了pMAL-c2x-Efp-0重組質(zhì)粒，在E.coli TB1中獲得融合蛋白MBP-EfP-0的可溶性表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物有酪蛋白平板及纖維蛋白平板溶解活性。
　　 根據(jù)Gen