Grp75細胞保護效應(yīng)的機制研究.pdf

1、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75是細胞內(nèi)的一種重要的分子伴侶,體內(nèi)的實驗證實在缺血反應(yīng)中g(shù)rp75都呈上調(diào)表達,為了探討PC12細胞缺糖反應(yīng)中g(shù)rp75的表達變化及其意義,該文應(yīng)用RT-PCR、蛋白印跡雜交、免疫細胞化學(xué)等方法研究了grp75的表達變化,并構(gòu)建了grp75的過表達和低表達的PC12細胞模型,用臺盼藍拒染法(typan blue exclusion)和MTT法檢測了不同細胞模型在缺糖培養(yǎng)后的細胞活力,同時對不同PC12細胞模型的ATP、

2、ROS以及線粒體跨膜電位的變化進行檢測.結(jié)果表明grp75在PC12細胞缺糖后3小時就開始持續(xù)性上升,在24小時后達到最高峰.grp75的低表達模型在缺糖培養(yǎng)后的細胞活力與對照組細胞沒有顯著性差異,而grp75的過表達模型則對PC12細胞的缺糖損傷表現(xiàn)出明顯的保護效應(yīng);grp75過表達模型在缺糖損傷過程中ATP的變化與對照組沒有顯著的差異,grp75的過表達同樣也沒有對缺糖過程中的線粒體跨膜電位的變化產(chǎn)生影響,但是grp75的過表達能夠

3、顯著地抑制缺糖后ROS的產(chǎn)生,表明抑制ROS的產(chǎn)生是grp75的細胞保護作用的可能機制之一.缺糖損傷會引起細胞內(nèi)一系列基因表達的變化,這些基因的表達對受損細胞的命運起著至關(guān)重要的作用,而其中引人注目的基因包括bcl-2家族的基因、p53基因等調(diào)控細胞存活或死亡的基因.為了闡明P53、bcl-2、bax在PC12缺糖損傷過程中的表達變化及其與grp75過表達之間的關(guān)系,該文用RT-PCR的方法檢測了PC12細胞損傷過程中bcl-2、bax

4、的表達變化,同時蛋白印跡檢測了p53蛋白的表達量,對比了grp75過表達的PC12細胞和對照組細胞中p53蛋白的變化過程,最后用免疫共沉淀的方法檢測grp7575蛋白是否與p53蛋白有直接的細胞內(nèi)作用.結(jié)果bcl-2基因在缺糖開始后上調(diào)表達,12小時后表達量最高,然后開始下降;bax基因則在缺糖的刺激下表達量持續(xù)下降;p53蛋白在缺糖后3小時表達量開始上升,到9小時達到最大值;grp75的過表達延遲了P53基因上調(diào)表達的時間;免疫共沉淀