利用單細胞PCR方法生產(chǎn)人源化單克隆抗體的探索.pdf

1、目的：抗體在免疫系統(tǒng)的功能中扮演著極為重要的角色。如何有效快速地生產(chǎn)抗體成為大家關心的問題。至1975年Milstein和Kohler所發(fā)明了經(jīng)典的雜交瘤單克隆抗體生產(chǎn)方法以來，生產(chǎn)單克隆抗體的技術不斷發(fā)展，至今已經(jīng)有多種有效的生產(chǎn)單克隆抗體的方法，如雜交瘤技術，噬菌體展示技術等等。目前，基因工程抗體的研究非?；馃?，而且在實際生產(chǎn)中已經(jīng)得到了應用。本文中，作者探討一種非常新穎有效的人源化單克隆抗體生產(chǎn)的方法，揭示出這種方法的廣闊前景。<

2、br>　　 方法：本研究中的生產(chǎn)完全人源化單克隆抗體的方法是基于目前流行的基因工程抗體技術和單細胞PCR技術進行的。通過從免疫完成的患者體內(nèi)取出外周血，分離外周血中的B細胞，并根據(jù)不同的實驗課題特征分選出不同亞群的B細胞，將B細胞梯度稀釋成單位體積1個細胞，然后將單位體積的細胞懸液加入到96孔細胞板中，直接裂解細胞，加入PCR體系進行多輪PCR以擴增出抗體分子的可變區(qū)。然后將此可變區(qū)克隆進包含有抗體其他部分基因的載體，共轉染構建完成的