藥對(duì)知母-黃柏的降糖作用及基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的化學(xué)物質(zhì)研究.pdf

1、目的：
　　1.研究藥對(duì)知母-黃柏的降糖作用;
　　2.研究藥對(duì)知母-黃柏中主要有效成分芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅡ以及生物堿類成分巴馬汀、藥根堿、黃柏堿、木蘭花堿和小檗堿的質(zhì)譜裂解規(guī)律;
　　3.對(duì)藥對(duì)知母-黃柏合煎液中的化學(xué)成分進(jìn)行分析鑒別;
　　4.測(cè)定藥對(duì)知母-黃柏中芒果苷、新芒果苷、巴馬汀、小檗堿等九種主要有效成分的含量，并與單味藥比較考察其含量變化;研究知母與黃柏按不同比例配伍對(duì)九種有

2、效成分含量的影響。
　　方法：
　　1.藥對(duì)知母-黃柏的降糖作用研究:采用高脂高糖飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(STZ)法建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型并進(jìn)行分組，糖尿病大鼠灌胃藥對(duì)知母-黃柏合煎液四周，測(cè)定空腹血糖、膽固醇等指標(biāo)并進(jìn)行糖耐量實(shí)驗(yàn)。
　　2.運(yùn)用UPLC-LTQ-Orbitrap對(duì)芒果苷、新芒果苷、小檗堿等有效成分的對(duì)照品溶液進(jìn)行多級(jí)質(zhì)譜解析，總結(jié)裂解規(guī)律。
　　3.藥對(duì)知母-黃柏化學(xué)成分的鑒別:

3、建立UPLC-LTQ-Orbitrap法對(duì)藥對(duì)知母-黃柏合煎液進(jìn)行全成分分析，結(jié)合主要成分的裂解規(guī)律、對(duì)照品比對(duì)、查閱相關(guān)文獻(xiàn)等多種方法對(duì)各成分進(jìn)行分析鑒別。
　　4.有效成分的含量測(cè)定:建立LC-MS/MS法測(cè)定知母和黃柏不同比例配伍時(shí)芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅡ、巴馬汀、藥根堿、黃柏堿、木蘭花堿和小檗堿的含量。
　　結(jié)果：
　　1.糖尿病大鼠給藥四周后，模型組血糖繼續(xù)升高，藥對(duì)知母-黃柏和鹽酸二甲雙

4、胍均對(duì)糖尿病大鼠血糖升高產(chǎn)生了抑制作用，藥對(duì)知母-黃柏能夠調(diào)控糖尿病大鼠血漿中膽固醇和甘油三酯水平，通過多靶點(diǎn)作用發(fā)揮中藥治療糖尿病的作用。
　　2.運(yùn)用UPLC-LTQ-Orbitrap對(duì)藥對(duì)知母-黃柏中主要成分的裂解規(guī)律進(jìn)行了總結(jié)，在正離子模式下，脫水(H2O)或者甲基(CH3)、亞甲基(CH2)是一個(gè)重要的裂解方式。知母皂苷類成分，主要是通過脫去葡萄糖(C6H12O6)或者脫水葡萄糖(C5H10O5)進(jìn)行裂解;相同分子質(zhì)量的

5、成分因?yàn)榭臻g結(jié)構(gòu)不同產(chǎn)生不同的分子碎片。
　　3.運(yùn)用UPLC-LTQ-Orbitrap于碰撞誘導(dǎo)解離(CID)模式分析藥對(duì)知母-黃柏水煎液，依據(jù)主要成分的裂解規(guī)律并參考相關(guān)文獻(xiàn)，共鑒別出61個(gè)化學(xué)成分，包括知母皂苷類化學(xué)成分9個(gè)，生物堿類化學(xué)成分25個(gè)，其他各類成分27個(gè)，知母皂苷類成分易與流動(dòng)相中甲酸結(jié)合，產(chǎn)生M+46加合峰。
　　4.建立LC-MS/MS法測(cè)定了藥對(duì)知母-黃柏中九種主要成分的含量:當(dāng)知母和黃柏配伍比例為

6、1:1時(shí)，芒果苷、新芒果苷、知母皂苷BⅡ和知母皂苷AⅢ的含量分別為4.96、9.33、3.62、43.6 mg·g-1，與單味藥知母相比BⅡ的含量基本不變，芒果苷、知母皂苷AⅢ的含量減少，新芒果苷的含量增加;巴馬汀、藥根堿、黃柏堿、木蘭花堿、小檗堿的含量分別為0.75、0.48、2.62、1.29、33.18 mg·g-1，與黃柏單味藥相比，巴馬汀的含量降低，其余四種成分含量基本保持不變;不同配伍比例對(duì)藥對(duì)知母-黃柏中有效成分含量有影響

7、，知母單煎時(shí)芒果苷、知母皂苷AⅢ含量最高;新芒果苷在知柏配伍比例1∶1時(shí)含量最高，巴馬汀與藥根堿此時(shí)含量最低;知母皂苷BⅡ和藥根堿的含量各配伍比例沒有明顯差異;木蘭花堿含量的在知母與黃柏1∶2配伍時(shí)含量最高。
　　結(jié)論：
　　本文通過建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型驗(yàn)證了藥對(duì)知母-黃柏的降糖作用;運(yùn)用UPLC-LTQ-Orbitrap法，研究了藥對(duì)知母-黃柏中主要成分的裂解規(guī)律，并以此為依據(jù)，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)資料鑒別了藥對(duì)知母-黃柏水煎液