PAPP-A均相化學(xué)發(fā)光檢測方法的建立和在ACS診斷中的初步應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　新近研究發(fā)現(xiàn)PAPP-A是冠狀動脈粥樣斑塊不穩(wěn)定性的炎性生物標(biāo)志物之一，血清PAPP-A的升高變化對急性冠脈綜合征的早期診斷及預(yù)后具有一定價值。與孕婦血清PAPP-A不同，非孕血清中的PAPP-A以低水平存在，而目前使用的PAPP-A檢測方法靈敏度較低，不適用非孕血清的檢測。本研究采用活性氧傳遞免疫分析技術(shù)方法，建立適合檢測ACS患者血清超敏PAPP-A水平的定量分析體系,評價分析方法的各項(xiàng)性能指標(biāo)。在此基礎(chǔ)上對ACS

2、患者標(biāo)本分組檢測，實(shí)驗(yàn)研究在急性冠狀動脈綜合征患者血清中，PAPP-A是否對ACS具有較好的預(yù)測作用，對此類疾病危險分層和預(yù)后評估的價值。
　　方法：
　　制備生物素化PAPP-A抗體和抗體包被的受體微球，以雙抗體夾心法與血清中PAPP-A結(jié)合，以光激化學(xué)發(fā)光分析方法檢測PAPP-A濃度。通過改變加樣模式、加樣順序，調(diào)整試劑比例和反應(yīng)時間溫度等方面，優(yōu)化檢測方法的反應(yīng)條件。利用ELISA Cale軟件建立四參數(shù)擬合方程的標(biāo)準(zhǔn)

3、曲線，初步建立PAPP-A均相化學(xué)發(fā)光免疫檢測方法。同時評價均相化學(xué)發(fā)光分析檢測PAPP-A方法的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性等各項(xiàng)性能指標(biāo)，初步推算正常人的參考范圍。根據(jù)病程進(jìn)展對急性冠脈綜合征患者進(jìn)行分組研究，比較各組 ACS患者與對照組的PAPP-A水平有何差別，同時與其它ACS相關(guān)的指標(biāo)進(jìn)行分析，初步探討PAPP-A與ACS之間的臨床相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　確定PAPP-A檢測方法：在96孔板中加入25ul生物素

4、化抗體（1:2000），25ul受體球（1:100），25ul樣本，于37℃孵育30min，避光條件下加入175ul供體微球，于37℃孵育10min測定信號值。此PAPP-A檢測方法靈敏度為0.55mU/L，回收率在95％-100%；線性、穩(wěn)定性及特異性良好；重復(fù)性：批內(nèi)變異系數(shù)（CV）小于10%，批間CV小于15%；選擇血紅蛋白、甘油三酯和膽紅素三種常見干擾因素對此檢測方法的干擾較小。采用時間分辨熒光免疫分析（TRFIA）與本實(shí)驗(yàn)建立

5、的均相化學(xué)發(fā)光法檢測30例（10例心?；颊?，20例孕婦）血清標(biāo)本，二者進(jìn)行相關(guān)分析（r2=0.988，P<0.05）。檢測104例健康體檢者（男/女：43/61，年齡：24-69歲）血清PAPP-A水平，初步推算參考范圍為1.60—25.12mU/L。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)建立了一種適用于ACS患者以均相化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測血清低妊娠相關(guān)血漿蛋白A水平的方法。我們所建立的超敏PAPP-A檢測方法準(zhǔn)確性好，靈敏度、回收率