骨髓間充質(zhì)干細胞移植對膠原誘導關(guān)節(jié)炎大鼠體內(nèi)CXCL10-CXCR3趨化軸和RANKL-OPG骨破壞通路作用機制的研究.pdf

1、目的：
　　觀察BMSCs移植后對CIA大鼠CXCL10/CXCR3趨化軸和RANKL/OPG骨破壞通路的影響，探討MSCs在體內(nèi)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的機制。
　　方法：
　　1.飼養(yǎng)Wistar大鼠，弗氏完全佐劑加II型膠原乳液2次免疫動物，經(jīng)觀察大鼠癥狀（大體觀、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、雙足腫脹度）、影像、病理評估，建立CIA模型。
　　2.采用密度梯度離心分離MSCs、結(jié)合貼壁培養(yǎng)法體外培養(yǎng)大鼠MSCs；通過流式細胞術(shù)檢測

2、BMSCs表面抗原CD44、CD105、CD29、CD34、CD45、CD31，排除法鑒定所培養(yǎng)的細胞為BMSCs。
　　3.造模成功的CIA大鼠隨機分為CIA模型組、MSCs治療早期（3d）組、MSCs治療晚期（30/42d）組，同時設(shè)立正常對照組，每組8只。經(jīng)尾靜脈移植BMSCs，每只大鼠移植的細胞數(shù)為1×107/kg。對照組以同樣的方法注射等量的生理鹽水。
　　4.各組大鼠干預(yù)后內(nèi)眥靜脈取血，應(yīng)用Elisa法檢測血清R

3、ANKL、OPG、CXCL10水平；取各組大鼠脾臟、淋巴結(jié)、滑膜等臟器，應(yīng)用免疫組化檢測組織CXCR3、TRAF6表達水平；應(yīng)用 RT-PCR檢測各組織 CXCL10/CXCR3、RANKL/OPG、TRAF6 mRNA相對表達量，應(yīng)用t檢驗或?qū)Ω鹘M應(yīng)用Wilcoxon秩和檢驗進行組間比較。
　　結(jié)果：
　　1.Witar大鼠骨髓中成功分離獲得間充質(zhì)干細胞，具有骨髓間充質(zhì)干細胞的形態(tài)學特點，表型鑒定表達CD44、CD105、

4、CD29，不表達CD45、CD34、CD31；
　　2.BMSCs移植可以改善CIA大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹程度、X線改變、病理改變；
　　3.BMSCs移植可抑制CIA大鼠CXCL10/CXCR3趨化軸水平，表現(xiàn)為①抑制血清CXCL10水平；②抑制淋巴結(jié)、滑膜組織趨化軸受體CXCR3蛋白的表達；③抑制脾臟、淋巴結(jié)、滑膜CXCL10 mRNA的表達，抑制淋巴結(jié)、滑膜CXCR3 mRNA的表達；
　　4.BMSCs移植

5、可抑制CIA大鼠RANKL/OPG通路水平，表現(xiàn)在①抑制血清RANKL水平，降低血清RANKL/OPG比例；②抑制脾臟、淋巴結(jié)、滑膜組織骨破壞通路胞內(nèi)轉(zhuǎn)導信號因子TRAF6的表達；③降低淋巴結(jié)、滑膜RANKL/OPG mRNA比例，抑制脾臟、淋巴結(jié)、滑膜TRAF6 mRNA的表達。
　　結(jié)論：
　　1.在 CIA大鼠免疫過程中存在 CXCL10/CXCR3趨化軸的紊亂，抑制CXCL10/CXCR3趨化軸水平是BMSCs干預(yù)緩