辣白菜中分離魏斯氏菌及其質(zhì)粒的序列分析.pdf

1、　　為了探討魏斯氏菌在辣白菜中起的作用和獲得與明串珠菌相關(guān)乳酸細(xì)菌的質(zhì)粒,并對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行初步研究,故分離獲得魏斯氏菌。
　　本課題是以辣白菜發(fā)酵汁為原料。首先通過形態(tài)特征篩選出疑似魏斯氏菌,再通過生長特性、生理生化檢測(cè)對(duì)該菌進(jìn)行初步鑒定。該菌表現(xiàn)出的形態(tài)為短桿狀,一頭較窄一頭較寬,經(jīng)革蘭氏染色顯示為紫色。在37°C生長,2°C弱生長,能承受3%的NaCl,而不能承受6.5%的NaCl濃度,過氧化氫酶陰性,能夠水解精氨酸和七葉苷,能

2、夠產(chǎn)生葡聚糖,并且經(jīng)葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣。綜合上述特性,參照《乳酸細(xì)菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》和《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》初步確定為魏斯氏菌。為了確定該魏斯氏菌的分類地位,本課題又做了16S rDNA的序列分析,構(gòu)建了魏斯氏菌的系統(tǒng)發(fā)育樹,進(jìn)行了16S rDNA序列的同源比對(duì),確定該菌為Weissella cibaria。將其命名為kimshi006,其16S rDNA在NCBI上的登錄號(hào)為HM369807。
　　為了進(jìn)一步了解該魏斯氏菌,

3、本課題對(duì)魏斯氏菌的質(zhì)粒進(jìn)行了提取。由于魏斯氏菌質(zhì)粒的拷貝數(shù)并不多,并且在提取過程中雜質(zhì)很多,用經(jīng)典的堿裂解法不能獲得質(zhì)粒。本課題根據(jù)魏斯氏菌的特性,改進(jìn)了堿裂解法,提取出魏斯氏菌質(zhì)粒,通過電泳觀察到其有大小兩種質(zhì)粒。將小質(zhì)粒連接 pUC19,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α。將重組菌送到公司測(cè)序,獲得魏斯氏菌小質(zhì)粒序列,并對(duì)質(zhì)粒序列進(jìn)行了初步分析。
　　本課題的研究意義在于從辣白菜中分離、篩選魏斯氏菌菌株,為中國內(nèi)地首次分離獲得魏斯氏菌。對(duì)