Cyclophilin A結合Caveolin-1降低大鼠血管平滑肌細胞膽固醇蓄積.pdf

1、目的：通過Ox-LDL誘導的血管平滑肌細胞荷脂模型，觀察膽固醇轉運復合物中關鍵蛋白cyclophilin A和caveolin-1在細胞荷脂過程中的表達變化及其與細胞內膽固醇蓄積的關系，進而分析這兩種蛋白在血管平滑肌源性荷脂細胞形成過程中的作用。
　　方法：實驗采用75mg/L Ox-LDL與血管平滑肌細胞共同孵育不同的時間(0，24，48，72h)，建立平滑肌細胞荷脂模型；Western-blot、免疫熒光法分別定量，定位檢測c

2、yclophihn A和caveolin-1蛋白的表達改變；油紅O染色觀察細胞內脂滴的形成情況；高效液相色譜法檢測細胞內外膽固醇含量變化，免疫共沉淀檢測cyclophilin A和caveolin-1相互作用。
　　結果：75mg/L Ox-LDL與血管平滑肌細胞共同孵育24，48，72小時后，與未處理組比較，cyclophilin A的蛋白表達逐漸減弱，同時，膽固醇轉運復合物中另一關鍵蛋白caveolin-1的表達也逐漸降低，差

3、異均有顯著性（P<0.05）。間接免疫熒光定位檢測發(fā)現(xiàn)Ox-LDL顯著抑制平滑肌細胞中cyclophilin A與caveolin-1在胞膜、胞漿中的表達，且隨著處理時間的延長，作用更明顯。油紅O染色顯示在Ox-LDL處理細胞48小時后，細胞內有大量脂滴的形成，高效液相檢測分析細胞內總膽固醇含量不斷增加，細胞外膽固醇總含量隨著Ox-LDL處理24、48、72小時依次下降。并且cyclosporin A抑制cyclophilin A活性后

4、能增加細胞內總膽固醇量和降低細胞外膽固醇總量。免疫共沉淀結果顯示cyclophilin A和caveolin-1在大鼠血管平滑肌細胞中能夠結合，而cyclosporin A能降低cyclophilin A與caveolin-1的結合能力。
　　結論：
　　1． Ox-LDL可能通過下調cyclophilin A與caveolin-1的表達促進血管平滑肌細胞內膽固醇蓄積。
　　2．抑制cyclophilin A活性可降低