Cyclophilin A結(jié)合Caveolin-1降低大鼠血管平滑肌細(xì)胞膽固醇蓄積.pdf

1、目的：通過(guò)Ox-LDL誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞荷脂模型，觀察膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合物中關(guān)鍵蛋白cyclophilin A和caveolin-1在細(xì)胞荷脂過(guò)程中的表達(dá)變化及其與細(xì)胞內(nèi)膽固醇蓄積的關(guān)系，進(jìn)而分析這兩種蛋白在血管平滑肌源性荷脂細(xì)胞形成過(guò)程中的作用。
　　方法：實(shí)驗(yàn)采用75mg/L Ox-LDL與血管平滑肌細(xì)胞共同孵育不同的時(shí)間(0，24，48，72h)，建立平滑肌細(xì)胞荷脂模型；Western-blot、免疫熒光法分別定量，定位檢測(cè)c

2、yclophihn A和caveolin-1蛋白的表達(dá)改變；油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況；高效液相色譜法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)外膽固醇含量變化，免疫共沉淀檢測(cè)cyclophilin A和caveolin-1相互作用。
　　結(jié)果：75mg/L Ox-LDL與血管平滑肌細(xì)胞共同孵育24，48，72小時(shí)后，與未處理組比較，cyclophilin A的蛋白表達(dá)逐漸減弱，同時(shí)，膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合物中另一關(guān)鍵蛋白caveolin-1的表達(dá)也逐漸降低，差

3、異均有顯著性（P<0.05）。間接免疫熒光定位檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Ox-LDL顯著抑制平滑肌細(xì)胞中cyclophilin A與caveolin-1在胞膜、胞漿中的表達(dá)，且隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，作用更明顯。油紅O染色顯示在Ox-LDL處理細(xì)胞48小時(shí)后，細(xì)胞內(nèi)有大量脂滴的形成，高效液相檢測(cè)分析細(xì)胞內(nèi)總膽固醇含量不斷增加，細(xì)胞外膽固醇總含量隨著Ox-LDL處理24、48、72小時(shí)依次下降。并且cyclosporin A抑制cyclophilin A活性后

4、能增加細(xì)胞內(nèi)總膽固醇量和降低細(xì)胞外膽固醇總量。免疫共沉淀結(jié)果顯示cyclophilin A和caveolin-1在大鼠血管平滑肌細(xì)胞中能夠結(jié)合，而cyclosporin A能降低cyclophilin A與caveolin-1的結(jié)合能力。
　　結(jié)論：
　　1． Ox-LDL可能通過(guò)下調(diào)cyclophilin A與caveolin-1的表達(dá)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)膽固醇蓄積。
　　2．抑制cyclophilin A活性可降低