姜黃素對(duì)血管平滑肌細(xì)胞膽固醇蓄積的影響及其與SREBP-1活性的關(guān)系.pdf

1、目的:探討姜黃素對(duì)血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)膽固醇蓄積的影響及其與固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1(SREBP-1)活性的關(guān)系。
　　方法:體外培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈VSMCs,不同濃度姜黃素(0、6、12.5、25、50μmol/L)作用于細(xì)胞12小時(shí),之后取最佳濃度12.5μmol/L姜黃素不同時(shí)間(0、3、6、12、24、48h)作用于細(xì)胞。高效液相色譜分析法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(TC)含量;Western印跡法檢測(cè)Caveolin-1蛋白

2、的表達(dá)。然后以50mg/Lox-LDL作用于VSMCs48小時(shí),造成荷脂細(xì)胞模型,不同濃度姜黃素(0、12.5、25、50μmol/L)作用于荷脂細(xì)胞24小時(shí),之后取最佳濃度25μmol/L姜黃素不同時(shí)間(0、6、12、24、48h)作用于荷脂細(xì)胞,高效液相色譜分析法(HPLC)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(TC),游離膽固醇(FC)和膽固醇酯(CE)的含量,Western印跡法檢測(cè)Caveolin-1蛋白及SREBP-1活性片段的表達(dá)。最后在

3、SREBP-1蛋白抑制劑ALLN干預(yù)下,25μmol/L姜黃素作用于VSMCs源性荷脂細(xì)胞24小時(shí),油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴情況,HPLC檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TC,FC,CE的含量,Western印跡法檢測(cè)SREBP-1活性片段、Caveolin-1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:不同濃度姜黃素(0、6、12.5、25、50μmol/L)作用于VSMCs12小時(shí),細(xì)胞內(nèi)TC含量及Caveolin-1表達(dá)均下調(diào);12.5μmol/L姜黃素不同時(shí)間(0

4、、3、6、12、24、48h)作用于VSMCs,細(xì)胞內(nèi)TC含量及Caveolin-1表達(dá)呈現(xiàn)先下調(diào)后上調(diào)變化趨勢(shì)。不同濃度姜黃素(0、12.5、25、50μmol/L)作用于VSMCs源性荷脂細(xì)胞24小時(shí)及25μmol/L姜黃素不同時(shí)間(0、6、12、24、48h)作用于VSMCs源性荷脂細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)TC,FC和CE含量呈現(xiàn)一定的下降趨勢(shì);SREBP-1、Caveolin-1蛋白的表達(dá)則呈現(xiàn)一定的上調(diào)趨勢(shì)。在 SREBP-1蛋白抑制劑