Ghrelin-GHSR-1a信號(hào)系統(tǒng)對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)控作用及相關(guān)機(jī)理研究.pdf

1、文章主要從以下幾方面進(jìn)行了論述。
　　第一部分:Ghrelin及其受體GHSR-1a在神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角的表達(dá)。
　　目的：研究Ghrelin及其受體GHSR-1a在神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角的表達(dá)情況。
　　方法：采用坐骨神經(jīng)結(jié)扎損傷模型(CCI)，雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組(n=6):正常對(duì)照組、7天假手術(shù)組、7天CCI模型組、14天假手術(shù)組、14天CCI模型組。各組大鼠均于術(shù)前1天、術(shù)后1、3、5、7和14

2、天，分別用VonFrey法和Hargreaves法檢測(cè)大鼠機(jī)械刺激縮足反射閾值(MWT)和熱縮足潛伏期(TWL)。用RT-PCR法檢測(cè)L4-6段脊髓背角勻漿液中的Ghrelin及GHSR-1amRNA表達(dá)，Western blot法檢測(cè)L4-6段脊髓背角勻漿液中的Ghrelin及GHSR-1a蛋白表達(dá)，ELISA法檢測(cè)L4-6段脊髓背角勻漿液中的Ghrelin表達(dá)水平。
　　結(jié)果：CCI組大鼠在術(shù)后1天出現(xiàn)機(jī)械刺激縮足反射閾值和熱

3、縮足潛伏期均降低的情況，與基礎(chǔ)值和假手術(shù)組相比，在術(shù)后3、5、7和14天顯著性降低(P＜0.05);與正常組和假手術(shù)組相比，術(shù)后7天和14天的CCI組大鼠脊髓背角Ghrelin及其受體GHSR-1a的mRNA及蛋白表達(dá)水平均有顯著性降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：Ghrelin及其受體GHSR-1a在各組大鼠脊髓背角中均有表達(dá)，且與假手術(shù)組相比，CCI大鼠脊髓背角的Ghrelin及其受體GHSR-1a表達(dá)均有顯著性降低。

4、　　第二部分:鞘內(nèi)注射Ghrelin對(duì)大鼠神經(jīng)病理性疼痛的影響。
　　目的：探討Ghrelin/GHSR-1a信號(hào)系統(tǒng)對(duì)CCI大鼠神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)控作用及相關(guān)機(jī)理。
　　方法：雄性SD大鼠隨機(jī)分為7組(n=6-7):正常對(duì)照組、假手術(shù)組、CCI模型組、Ghrelin低劑量組、Ghrelin中劑量組、Ghrelin高劑量組、Ghrelin受體拮抗劑組。各組大鼠均于坐骨神經(jīng)結(jié)扎后一天開始鞘內(nèi)給藥，Ghrelin低、中、高劑量分

5、別給予1、3、10μg的Ghrelin，Ghrelin受體拮抗劑組先鞘內(nèi)注射50μg的[D-Ly3]-GHRP-6，30min后再鞘內(nèi)注射10μg的Ghrelin，其余各組分別鞘內(nèi)注射等體積溶媒，共給藥7天。各組大鼠于術(shù)前1天、術(shù)后1、3、5和7天給藥后，分別用VonFrey法和Hargreaves法檢測(cè)大鼠機(jī)械刺激縮足反射閾值(MWT)和熱縮足潛伏期(TWL)，術(shù)后7天取材。用Western blot法和免疫組化法檢測(cè)L4-6段脊髓背

6、角p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化情況，ELISA法檢測(cè)L4-6段脊髓背角勻漿液中IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.鞘內(nèi)注射中、高劑量的Ghrelin在術(shù)后3、5和7天均不同程度顯著延遲了CCI大鼠熱痛敏和機(jī)械痛敏的形成(P＜0.05)，而低劑量組僅在術(shù)后5、7天顯著延緩了CCI大鼠熱痛敏的形成(P＜0.01)，并且Ghrelin受體拮抗劑組在術(shù)后3、5和7天均能顯著阻斷Ghrelin高劑量

7、組對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的拮抗作用(P＜0.05)。2.Western blot結(jié)果顯示:術(shù)后7天，p-p38 MAPK和胞核NF-κB p65在各組脊髓背角均有表達(dá)。與假手術(shù)組相比，CCI組的表達(dá)均顯著性增高(P＜0.01);與CCI組相比，Ghrelin低劑量組有降低的趨勢(shì)，中、高劑量組均有顯著性降低(P＜0.05);并且Ghrelin高劑量組抑制p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化的作用被Ghrelin受體拮抗劑組顯著性阻斷(

8、P＜0.05)。3.免疫組化染色顯示:術(shù)后7天，胞漿和胞核p-p38 MAPK及胞核NF-κB p65在各組脊髓背角均有表達(dá)。與假手術(shù)組相比，CCI組的表達(dá)均有顯著性增加(P＜0.01);與CCI組相比，Ghrelin低、中、高劑量組的表達(dá)均是顯著性降低(P＜0.05);并且Ghrelin高劑量組抑制p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化的作用被Ghrelin受體拮抗劑組顯著阻斷(P＜0.01)。4.術(shù)后7天，CCI組大鼠脊髓背

9、角的IL-1β、IL-6和TNF-α水平顯著高于假手術(shù)組(P＜0.01);Ghrelin低、中、高劑量組均顯著低于CCI組(P＜0.05);而這些促炎細(xì)胞因子在Ghrelin高劑量組中的含量均顯著低于Ghrelin受體拮抗劑組(P＜0.01)。
　　結(jié)論：Ghrelin能顯著抑制CCI大鼠脊髓背角p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化，減少促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌，從而發(fā)揮緩解CCI大鼠神經(jīng)病理性