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文檔簡(jiǎn)介
1、本文主要從以下四個(gè)部分展開論述:
第一部分 小肝癌病人預(yù)后分析
目的:探索小肝癌病人預(yù)后影響因素。
方法:回顧性分析287例行根治性手術(shù)切除的小肝癌病人的臨床病理特征,包括臨床資料(年齡、性別、病毒感染、血清甲胎蛋白水平(AFP)、周圍肝硬化、腫瘤包膜以及邊界),病理學(xué)資料(腫瘤病理學(xué)分化、形態(tài)學(xué)亞型、微脈管浸潤(rùn)(MVI)、腫瘤炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(TIL)、周圍肝炎癥以及硬化分級(jí)),分析上述臨床病理因素對(duì)小肝癌病
2、人預(yù)后的影響及與MVI的關(guān)系。
結(jié)果:287位病人中,238(82.9%)位為男性,49(17.1%)位為女性,中位年齡52歲。疾病無進(jìn)展生存(PFS)以及總體生存中位時(shí)間(OS)均為54個(gè)月。94.0%(268/287)病人有乙型肝炎病毒感染;280位(280/287)具有術(shù)前AFP水平記錄的病人中,102位(36.4%)病人AFP水平≥200ug/ml;180位(180/287)病人具有術(shù)后AFP水平記錄,其中119位(6
3、6.1%)病人AFP水平≥20ug/ml。89.5%(257/287)位病人周圍肝有硬化。283位(283/287)具有腫瘤包膜記錄的病人中,165位(58.3%)病人腫瘤包膜完整,118位(41.7%)病人腫瘤具有部分包膜。97.8%(272/287)病人腫瘤具有完整的推擠性邊界。46位(16.0%)病人發(fā)現(xiàn)MVI。
單因素分析提示,有MVI的病人PFS縮短(P值為0.019)。有MVI的肝癌病人中,女性病人(P=0.000
4、、0.003)、術(shù)后血清AFP水平≥20ug/ml(P=0.011、0.008)、TIL≥50/HPF(P=0.000、0.019)、腫瘤邊界清楚(P=0.004、0.043)、腫瘤分化為G1/G2級(jí)(P=0.013、0.012)的病人,PFS以及OS較無MVI的病人縮短。周圍肝有硬化且有MVI的肝癌病人,PFS時(shí)間縮短(P=0.003)。年齡<50歲的肝癌病人,MVI對(duì)其PFS有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的影響(P=0.028)。
結(jié)論:<
5、br> 1.MVI是小肝癌病人PFS的獨(dú)立預(yù)后影響因素。
2.有MVI肝癌病人中,女性、術(shù)后AFP水平≥20ug/ml、TIL≥50個(gè)/HPF、腫瘤邊界清楚、腫瘤中分化的病人的PFS及OS較無MVI病人縮短。MVI對(duì)周圍肝有硬化或年齡<50歲的肝癌病人的PFS的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
第二部分 新鮮肝癌以及癌栓組織microRNA的篩選
目的:篩選肝癌和癌栓組織中表達(dá)有差異的microRNA。
方法
6、:收集16例新鮮肝癌組織和癌栓組織,提取總RNA后,應(yīng)用Real-timeRT-PCR獲得基因表達(dá)的CT值,以U47作為內(nèi)參,根據(jù)目的基因在對(duì)比組織間相對(duì)表達(dá)量的升高、降低分為兩組,應(yīng)用非配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。
結(jié)果:1.在新鮮肝癌組織和癌栓組織中分析723種microRNA的差異表達(dá),發(fā)現(xiàn)19種microRNA在兩組組織間的相對(duì)表達(dá)量有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05),其中15種microRNA在癌栓組織中的表達(dá)顯著低于肝癌組織,分
7、別為hsa-miR-125a-3p(P=0.01)、hsa-miR-575(P=0.03)、hsa-miR-320(P=0.02)、hsa-miR-122(P=0.01)、hsa-let-7c(P=0.03)、hsa-miR-338-3p(P=0.02)、hsa-miR-26a(P=0.02)、hsa-miR-486-5p(P=0.00)、hsa-miR-202(P=0.04)、hsa-miR-765(P=0.02)、hsa-miR-1
8、25b-2*(P=0.01)、hsa-miR-564(P=0.03)、hsa-miR-342-5p(P=0.03)、hsa-miR-623(P=0.03)、hsa-miR-7-1*(P=0.01),4種microRNA在癌栓組織中的表達(dá)顯著高于肝癌組織,分別為hsa-miR-21(P=0.00)、hsa-miR-551b(P=0.04)、hsa-miR-27a(P=0.00)、hsa-miR-876-3p(P=0.04)。
2
9、.選擇在癌栓與肝癌組織中表達(dá)差異最大的兩種microRNA,即hsa-miR-125a-3p、hsa-miR-575作為目的microRNA,在石蠟標(biāo)本中進(jìn)一步驗(yàn)證。
結(jié)論:1.在723種microRNA中,發(fā)現(xiàn)19種microRNA在肝癌以及癌栓組織之間的相對(duì)表達(dá)量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中15種microRNA在癌栓組織中的表達(dá)顯著低于肝癌組織,分別為hsa-miR-125a-3p、hsa-miR-575、hsa-miR-320
10、、hsa-miR-122、hsa-let-7c、hsa-miR-338-3p、hsa-miR-26a、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-202、hsa-miR-765、hsa-miR-125b-2*、hsa-miR-564、hsa-miR-342-5p、hsa-miR-623、hsa-miR-7-1*,4種microRNA在癌栓組織中的表達(dá)顯著高于肝癌組織,分別為hsa-miR-21、hsa-miR-551b、hsa-miR
11、-27a、hsa-miR-876-3p。
2.選擇hsa-miR-125a-3p、hsa-miR-575作為目的microRNA,在肝癌石蠟標(biāo)本中進(jìn)一步驗(yàn)證。
第三部分 目的microRNA與肝癌病人臨床病理因素相關(guān)性分析
目的:在石蠟標(biāo)本中驗(yàn)證miR125A-3P及miR575的表達(dá),并分析microRNA的差異表達(dá)與肝癌病人臨床病理因素的相關(guān)性。
方法:用顯微切割的方法收集36例石蠟標(biāo)本的HC
12、C、MVI、Non-tumor,應(yīng)用RT-PCR方法獲得基因表達(dá)的CT值,以U47作為內(nèi)參,通過計(jì)算,獲得目的基因在MVI、HCC、Non-tumor組織間的變化趨勢(shì)。應(yīng)用Fisher's exact test分析基因表達(dá)的高低與肝癌病人臨床病理因素間的相關(guān)性。
結(jié)果:1.36例肝癌病人,男性病人31例,女性病人5例,中位年齡為50歲。33例病人有HBV感染,其余3例無肝炎病毒感染。22例病人有肝硬化,14例病人周圍肝無硬化。
13、18例病人有微脈管浸潤(rùn)。
2.通過顯微切割技術(shù)獲得純凈的標(biāo)本,所抽提石蠟組織總RNA濃度為4.1-422.1 ng/ul。
3.在HCC以及非癌肝組織中,miR125A-3P、miR575的相對(duì)表達(dá)與性別、年齡、肝硬化、腫瘤組織學(xué)分化程度、有無MVI以及TIL無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
4.18例有癌栓肝癌病人中,miR125A-3P在TIL≥50個(gè)/HPF以及<50個(gè)/HPF兩組病人的MVI以及非癌肝組織間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)
14、差異。
結(jié)論:
1.miR125A-3P、miR575在有癌栓肝癌病人MVI組織中的相對(duì)表達(dá)量低于HCC以及非癌肝組織,在非癌肝組織中的相對(duì)表達(dá)量最高。
2.miR125A-3P、miR575在無癌栓肝癌病人HCC組織中的相對(duì)表達(dá)量低于非癌肝組織。
3.miR125A-3P在有癌栓肝癌病人TIL≥50個(gè)/HPF以及<50個(gè)/HPF兩組病人的MVI、非癌肝組織間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
第四部分
15、石蠟組織中目的microRNA表達(dá)差異分析
目的:探討miR125A-3P和miR575在有無癌栓兩組肝癌病人HCC、MVI以及非癌肝組織中的表達(dá)差異。
方法:應(yīng)用顯微切割技術(shù)收集肝癌病人的HCC、MVI以及Non-tumor FFPE標(biāo)本,行RT-PCR獲得基因表達(dá)的CT值,以U47作為內(nèi)參,通過配對(duì)t檢驗(yàn),探索目的基因在MVI、HCC和Non-tumor組織間的變化趨勢(shì)。
結(jié)果:1.有癌栓肝癌病人MVl
16、、HCC、Non-tumor組織三組樣本兩兩配對(duì),miR125A-3P在MVI組織中的表達(dá)均低于HCC和非癌肝組織,P值分別為0.0053、0.0542。miR575也顯示出來同樣的表達(dá)趨勢(shì),P值分別為0.1211、0.2947。miR125A-3P和miR575在HCC組織中的表達(dá)均低于非癌肝組織,P值分別為0.4433、0.3394;0.1945、0.4934。
2.miR125A-3P、miR575在有癌栓病人HCC以及
17、非癌肝組織中的相對(duì)表達(dá)量均高于無癌栓組肝癌病人對(duì)應(yīng)組織,兩組病人HCC與非癌肝組織中miR125A-3P的相對(duì)表達(dá)量均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P值分別為0.0021、0.0336。miR575在兩組病人間HCC與非癌肝組織中的相對(duì)表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P值分別為0.1478、0.2977。
結(jié)論:
1.miR125A-3P在有癌栓肝癌病人MVI與HCC組織中的表達(dá)具有明顯差異,miR575未顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩種基因在有癌栓肝
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